【摘 要】
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目的:构建一个全新的分泌型TAT蛋白转导结构域基因哺乳动物细胞融合表达载体并对融合蛋白的表达进行分析.方法: 依照编码TAT-PTD11肽及所引入的BamH I酶识别序列和增强性绿色
【机 构】
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华东理工大学生物反应器国家重点实验室
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目的:构建一个全新的分泌型TAT蛋白转导结构域基因哺乳动物细胞融合表达载体并对融合蛋白的表达进行分析.方法: 依照编码TAT-PTD11肽及所引入的BamH I酶识别序列和增强性绿色荧光蛋白N端7个氨基酸的碱基序列合成了3条引物, 以egfp基因为模板通过依次3轮PCR扩增得到tat-egfp融合基因, 该基因片段以Sfi I和Hind Ⅲ双酶切后插入哺乳动物细胞表达载体pSectagA, 构建成重组载体pSecTAT-m-egfp, BamH I单酶切后该载体自连, 即得到可通用的真核表达载体pSecTAT-m, 重组质粒pSecTAT-m-egfp转染HEK293细胞, 融合蛋白的表达用Western blot分析.结果: 酶切及测序证实表达载体pSecTAT-m构建成功, Western blot表明TAT-EGFP融合蛋白在HEK293细胞中获得表达并分泌到细胞培养液中.结论: 成功地构建了分泌型TAT蛋白转导结构域基因的哺乳动物细胞融合表达载体, 为更充分发挥TAT蛋白转导结构域在蛋白质功能及疾病治疗研究中的应用打下了基础.
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