【摘 要】
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目的:探讨转录因子Krüppel样因子4（KLF4）与miR-106a表达的调控关系及其对人胃癌细胞迁移的影响。方法:使用基因组数据库UCSC预测miR-106a启动子,插入pGL3-Basic报告载体,构建
【机 构】
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宁夏医科大学总医院消化内科,宁夏医科大学总医院病理科,解放军第三二三医院消化内科,西安交通大学医学部第一附属医院消化内科
【基金项目】
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宁夏自然科学基金资助项目(NZ16148,NZ16276);宁夏高等学校优秀青年教师培育基金项目(NGY2016123)
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目的:探讨转录因子Krüppel样因子4（KLF4）与miR-106a表达的调控关系及其对人胃癌细胞迁移的影响。方法:使用基因组数据库UCSC预测miR-106a启动子,插入pGL3-Basic报告载体,构建野生型报告质粒pmiR-106a-WT-luc和点突变报告质粒pmiR-106a-MUT-luc。使用转录因子数据库JASPAR预测并筛选调控miR-106a的转录因子KLF4,克隆至pcDNA3.0载体,构建KLF4过表达质粒KLF4-pcDNA3.0。将KLF4+/--pcDNA3.0与pmiR-106a-WT/MUT-luc共同转染HEK293T细胞,双荧光素酶系统检测荧光值。收集30对胃癌和癌旁组织标本,采用实时定量PCR（qPCR）检测miR-106a、KLF4 mRNA表达水平。Transwell法检测人胃癌SGC-7901细胞的迁移能力。结果:miR-106a报告质粒及KLF4过表达质粒经双酶切、PCR扩增、测序及Blast比对提示构建正确。KLF4-pcDNA3.0显著抑制pmiR-106a-WT-luc荧光素酶活性（P=0.000）,但对pmiR-106a-MUT-luc影响较小（P=0.553）。胃癌组织中KLF4 mRNA平均相对表达量为0.716±0.624,miR-106a为3.367±2.165。KLF4-pcDNA3.0部分阻遏miR-106a对胃癌SGC-7901细胞迁移的促进作用（P=0.038）。结论:转录因子KLF4与miR-106a启动子区存在直接结合位点,KLF4可能在上游转录水平负调控miR-106a成熟体表达,以此发挥部分阻遏miR-106a促胃癌细胞迁移的作用。
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