【摘 要】
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目的 探索重组猪胰蛋白酶(简称重组猪胰酶)在制备狂犬病疫苗[鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibro-blast,CEF)]中的应用.方法 采用SDS-PAGE及Western blot法分析鉴定重组猪
【机 构】
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上海青赛生物科技有限公司,上海201500
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目的 探索重组猪胰蛋白酶(简称重组猪胰酶)在制备狂犬病疫苗[鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibro-blast,CEF)]中的应用.方法 采用SDS-PAGE及Western blot法分析鉴定重组猪胰酶及猪胰酶;用1.25 mg/mL猪胰酶及1、0.25、0.062 5、0.015 625 mg/mL重组猪胰酶分别消化制备原代CEF,比较细胞活率、单胚细胞收获量、体外培养48 h 的细胞增殖比及培养96 h 的细胞形态,筛选最适重组猪胰酶工作浓度;用最适浓度重组猪胰酶及1.25 mg/mL猪胰酶消化后原代CEF对狂犬病病毒滴度的影响.结果 重组猪胰酶仅有1条蛋白条带,纯度100％,而猪胰酶有多条蛋白杂带,纯度33％;与1.25 mg/mL猪胰酶比较,0.062 5 mg/mL重组猪胰酶消化的CEF细胞活率、单胚细胞收获量及培养48 h 的细胞增殖比差异均无统计学意义(P均＞0.05),且其细胞形态相当,其最适工作浓度为0.062 5mg/mL;2种胰酶制备CEF的狂犬病病毒滴度差异无统计学意义(P＞0.05).结论 重组猪胰酶可代替猪胰酶用于狂犬病疫苗(CEF细胞)的生产.
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