利用改进的基因组步行技术克隆新型水解酶全基因

来源 :中国医药工业杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhouhai3032
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利用同源-简并的混合寡核苷酸引物(consensus-degeneratehybrid oligonucleotide primers,CODEHOP)介导新微粒酶的PCR筛选,得到这些酶所有的基因片段,并用改进的基因组步行技术得到所鉴定基因的全序列。本研究基于盒式一连接改进了基因组步行方法,主要在于可用任意的限制性内切酶消化基因组DNA,用Taq DNA聚合酶对消化的DNA进行末端平滑化,并加上一个腺嘌呤(A)避免自身环化,随后腺嘌呤3’端连接于同样未磷酸化的寡核苷酸盒完成TA连接。
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