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选取酿酒酵母基因组rDNA序列中25S和5S rDNA之间的一段约2．2kb序列作为整合载体同源重组到酿酒酵母基因组中的靶位点，PCR扩增得到该段序列左右2段大小分别为865bp和1350bp的片段．将其与URA3、磷酸丙糖异构酶启动子和终止子序列依次克隆入pUC18中，构建成整合型载体pNK。以绿色荧光蛋白基因为报告基因，荧光显微镜下观察到酿酒酵母菌株INVSc1转化子发出较强荧光，Southern杂交产生目的条带，这些结果表明载体pNK具有整合并表达外源基因功能。通过对转化子连续培养证明构建的整合型载