【摘 要】
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目的:探索中药柴胡疏肝散对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)内微小RNA124(miR-124)的调控作用以及相关蛋白表达的影响,进一步阐明柴胡疏肝散调控神经细胞的具体作用机制和途径.方法:培养SH-SY5Y细胞,转染pCDNA3.1-miR-124质粒,并予柴胡疏肝散干预,提取细胞蛋白并酶解,同位素标记相对和绝对定量技术(iTRAQ)标记,采用高效液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)鉴定蛋白,软件Proteome Discoverer1.3处理数据,并进一步进行生物信息学分析,Western blo
【机 构】
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深圳大学第一附属医院深圳市第二人民医院,广东深圳518035
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目的:探索中药柴胡疏肝散对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)内微小RNA124(miR-124)的调控作用以及相关蛋白表达的影响,进一步阐明柴胡疏肝散调控神经细胞的具体作用机制和途径.方法:培养SH-SY5Y细胞,转染pCDNA3.1-miR-124质粒,并予柴胡疏肝散干预,提取细胞蛋白并酶解,同位素标记相对和绝对定量技术(iTRAQ)标记,采用高效液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)鉴定蛋白,软件Proteome Discoverer1.3处理数据,并进一步进行生物信息学分析,Western blot验证差异表达蛋白.结果:SH-SY5Y细胞经转染miR-124质粒后miR-124表达显著上升,而转染miR-124质粒细胞在柴胡疏肝散处理后,miR-124表达显著下降.表明对于SH-SY5Y细胞柴胡疏肝散可以下调miR-124表达.蛋白质组分析共鉴定出肽段15487个,蛋白3707个.免疫印迹检测差异蛋白NudE神经发育蛋白1(NDE1),在miR-124过量表达时NDE1蛋白表达量显著上升,而在柴胡疏肝散与miR-124共同作用时该蛋白表达量显著下调,说明柴胡疏肝散可通过下调miR-124表达,进而恢复NDE1的正常表达.结论:本研究表明柴胡疏肝散可能经miR-124调控下游相关蛋白表达以及信号通路,从而影响神经细胞的发育、增殖和分化等功能.
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