大鼠脑线粒体体外蛋白翻译体系的建立及蛋白产物的鉴定

来源 :中国应用生理学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:illusions1018
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目的:建立大鼠脑组织线粒体的体外蛋白合成体系并对其合成产物进行电泳分离和分子量鉴定。方法:分离大鼠脑组织线粒体,用^3H-亮氨酸掺入法探索线粒体体外翻译的最佳条件,^35S-蛋氨酸掺入并对翻译后产物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和放射自显影进行分子量鉴定。结果:分离的线粒体氧化磷酸化偶联程度高,呼吸控制率(RCR)在3.5-5.5之间;体外^3H-亮氨酸的掺入活性在60min内近似线性增长,而后维持在一相对稳定水平;^3H-亮氨酸的掺入活性随线粒体蛋白浓度而增加,而单位线粒体蛋白的掺入活性在1mg/ml时最
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