【摘 要】
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为了解流行性乙型脑炎病毒NS4B蛋白的结构及功能,本研究构建了乙脑病毒P3株ns4b基因原核表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达蛋白,并通过Western blot确定所表达蛋白为目的基
【机 构】
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塔里木大学动物科学学院,新疆 阿拉尔,843300塔里木大学生命科学学院,新疆 阿拉尔,843300;塔里木大学动物科学学院,新疆 阿拉尔843300;新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室,新疆
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为了解流行性乙型脑炎病毒NS4B蛋白的结构及功能,本研究构建了乙脑病毒P3株ns4b基因原核表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达蛋白,并通过Western blot确定所表达蛋白为目的基因的产物.DNAStar软件分析其核苷酸和氨基酸序列特征,建立遗传进化树,利用生物信息学方法对其理化性质、蛋白结构等方面进行预测.结果显示,P3株ns4b基因全长765 bp,GC含量54.64％,包含21个酶切位点,与其他毒株的遗传距离为0.8,说明ns4b基因非常保守;编码255个氨基酸,预期大小为27 KDa,其中有20个强碱性氨基酸、15个强酸性氨基酸,等电点为9.24,为碱性蛋白,中性环境中带正电.生物信息分析表明NS4B蛋白无信号肽,有3个跨膜区域;无糖基化位点,磷酸化位点26个;亲水性良好;其蛋白二级结构有较多α-螺旋与无规则卷曲,中间较大的螺旋和两端的无规则卷曲构成其特殊三级结构.试验成功构建了原核表达载体pET42b-NS4B,在大肠杆菌中以包涵体的形式表达较大量蛋白,大小与预期一致.JEV-ns4b是该病毒较为关键的非结构蛋白基因,可通过原核表达系统高效表达蛋白,研究其蛋白功能,有助于进一步优化乙型脑炎疫苗.
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