【摘 要】
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为了构建基于血凝素(hemagglutinin,HA)茎干部的流感通用疫苗并研究其免疫原性,本研究以A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)流感病毒为模板,扩增HA茎干部区域主要蛋白HA2(HA的344~56
【机 构】
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青岛农业大学动物科技学院/山东省高校预防兽医学重点实验室/山东省兽药诊断试剂工程技术研究中心;
【基金项目】
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青岛市科技计划基础研究项目(No.13-1-4-213-jch);财政部中国亚太经合组织合作基金项目;山东省高等学校优势学科“兽医生物技术”人才团队培育计划
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为了构建基于血凝素(hemagglutinin,HA)茎干部的流感通用疫苗并研究其免疫原性,本研究以A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)流感病毒为模板,扩增HA茎干部区域主要蛋白HA2(HA的344~566 aa)和完整茎干部HA-stem(缺失53 aa~276 aa的HA),与真核表达载体p CAGGS连接获得重组质粒。将重组质粒瞬时转染至HEK-293T细胞,利用RT-PCR及间接免疫荧光实验检测其表达情况。将6~8周龄健康雌性BALB/c小鼠(Mus musculus)分为4组,即2个重组质粒组及p CAGGS质粒对照组和磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline,PBS)对照组,分别于0和30 d免疫2次,在免疫当天(第0天)及免疫后第60天采集小鼠眼眶血,测定其HI抗体、细胞中和抗体和IFN-γ水平。结果表明,成功构建了重组质粒p CAGGSHA2和p CAGGS-HA-stem,且重组质粒转染HEK-293T细胞后均能检测到目的蛋白及其m RNA。免疫后第60天p CAGGS-HA2和p CAGGS-HA-stem免疫组对A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)病毒的HI抗体效价均为5 log2,中和抗体效价分别为1∶27和1∶24。对异源病毒A/Chicken/Hebei/4/2008(H9N2)病毒的HI抗体效价分别为3 log2和6 log2,中和抗体效价分别为1∶24和1∶22。p CAGGS-HA2和p CAGGS-HA-stem组INF-γ含量分别为(2362.40±98.24)ng/L和(2497.06±120.44)ng/L。p CAGGS-HA2及p CAGGS-HA-stem诱导产生的抗体及INF-γ水平与免疫前及对照组相比差异显著(P<0.05)。结果表明,p CAGGS-HA2和p CAGGS-HA-stem能够诱导对异源病毒的交叉反应,有望作为候选的流感通用疫苗。
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