腺相关病毒介导血红素加氧酶-1基因转移对大鼠脊髓损伤的保护作用

来源 :中华实验外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:winter2009
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目的

观察血红素加氧酶-1(HO-1)过表达对脊髓损伤(SCI)后运动功能恢复的影响,并探讨其机制。

方法

96只健康雄性SD大鼠,应用完全随机法分为假手术组(Sham组)、单纯SCI组(SCI组)、空载体组[AAV-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)组]和HO-1过表达腺相关病毒载体组(AAV-HO-1组),采用重物压迫脊髓损伤模型;采用Basso-Beattie-Bresnahan (BBB)评分评估大鼠后肢运动功能;原位缺口末端标记法(TUNEL)检测脊髓组织细胞凋亡;荧光显微镜下观察EGFP表达;免疫荧光染色显示脊髓组织中神经元核性蛋白(NeuN)阳性细胞的表达;Western blot测定脊髓组织中HO-1、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)蛋白表达。

结果

SCI后1 d,可观察到AAV-EGFP组和AAV-HO-1组脊髓组织有EGFP表达;AAV-HO-1组与SCI组和AAV-EGFP组比较,凋亡细胞数量[分别为(21.50±8.02)%、(49.83±13.60)%、(44.83±11.74)%]、bax蛋白表达量(分别为1.15±0.19、1.96±0.24、1.77±0.30)明显减少,差异有统计学意义(分别为F=30.630,P=0.000;F=29.900,P=0.000),而AAV-HO-1组与SCI组和AAV-EGFP组比较,HO-1(分别为1.96±0.28、1.48±0.23、1.54±0.16)、bcl-2蛋白表达量(分别为0.69±0.13、0.35±0.11、0.29±0.10)明显增加,差异有统计学意义(分别为F=23.900,P=0.000;F=68.140,P=0.000);SCI后7、14、21 d,AAV-HO-1组BBB评分[分别为(8.00±1.79)、(11.67±2.16)、(13.83±2.22)分]明显高于SCI组[分别为(5.17±1.94)、(6.17±1.72)、(7.50±1.97)分]和AAV-EGFP组[分别为(4.67±1.51)、(5.67±1.86)、(7.17±2.14)分],差异有统计学意义(分别为F=152.900,P=0.000;F=109.700,P=0.000;F=75.880,P=0.000)。SCI后21 d,AAV-HO-1组(108.5±27.74)的NeuN阳性细胞较SCI组(50.00±20.93)和AAV-EGFP组(55.83±13.57)明显增加,差异有统计学意义(F=40.740,P=0.000)。

结论

HO-1过表达能明显提高SCI后运动功能的恢复,对SCI具有保护作用。

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