【摘 要】
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目的 (1)研究消除PCR反应非特异性扩增新技术.(2)研究全血直接PCR能否用于葡萄糖6-磷酸脱氢酶基因突变检测.方法 (1)将新鲜全血混合基因组DNA进行PCR扩增,看全血能否抑制基因
【机 构】
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中国广州中山大学基础医学院医学遗传教研室,510080
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目的 (1)研究消除PCR反应非特异性扩增新技术.(2)研究全血直接PCR能否用于葡萄糖6-磷酸脱氢酶基因突变检测.方法 (1)将新鲜全血混合基因组DNA进行PCR扩增,看全血能否抑制基因组DNA非特异性扩增,将新鲜人血清混合基因组DNA进行PCR扩增,看新鲜人血清能否抑制基因组DNA非特异性扩增.(2)将1μl全血加入PCR反应液,98℃变性后转入PCR循环,使用Taq(Fermentas)扩增G6PD基因外显子3-4,取扩增产物50μl进行DNA双向自动测序,使用ClustalX软件将测序结果与基因库中标准G6PD基因外显子3-4序列进行比对分析.结果 (1)发现新鲜全血能抑制基因组DNA非特异性扩增,进一步研究发现是新鲜人血清抑制了基因组DNA非特异性扩增.(2)全血直接PCR加上DNA测序找到一例G6PD突变g.13503A>G.结论 (1)新鲜人血清中存在PCR非特异性扩增抑制因子.(2)使用Taq DNA聚合酶(Fermentas)能进行全血直接PCR扩增,加上DNA测序可用于G6PD基因突变研究.
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