【摘 要】
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目的 观察在人胶质瘤细胞中微小RNA(miRNA,miR)-3175通过3端非编码区(3-UTR)对同源异形盒基因家族成员B1(HOXB1)表达的调控作用.方法 通过生物信息学可见miR-3175与HOXB1基因
【机 构】
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吉林大学第一医院儿科急诊, 长春,130021;吉林大学中日联谊医院VIP病房;浙江中医药大学生命科学学院;吉林大学中日联谊医院神经外科;
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目的 观察在人胶质瘤细胞中微小RNA(miRNA,miR)-3175通过3端非编码区(3-UTR)对同源异形盒基因家族成员B1(HOXB1)表达的调控作用.方法 通过生物信息学可见miR-3175与HOXB1基因3-UTR相互配对,构建HOXB1基因3-UTR野生型和变异型荧光素酶载体,生物合成miR-3175 mimics、miR-3175 inhibitor和各自阴性对照.采用Lipofectamine 2000转染和双荧光素酶报告基因系统检测人胶质瘤细胞株(A172、U87)中miR-3175对HOXB1基因3-UTR的调控作用.寡核苷酸转染24、48、72 h后,通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和West blot分析miR-3175在人胶质瘤细胞株(A172、U251、U87)对HOXB1基因的表达调控.结果 双荧光素酶报告基因系统提示共转染HOXB1基因野生型载体和miR-3175 mimics后荧光素酶活性明显下降(P＜0.05),A172细胞株荧光素酶活性下降(37.38±10.98)％,U87细胞株荧光索酶活性下降(24.62±3.22)％.与对照组比较miR-3175 mimics可下调HOXB1基因的表达,转染72h后HOXB1 mRNA表达水平在A172细胞株中下降(42.57±5.52)％,U251细胞株中下降(71.06±0.41)％,U87细胞株中下降(55.54±7.57)％;miR-3175 inhibitor可上调HOXB1基因的表达,转染72 h后HOXB1 mRNA表达水平在A172细胞株中升高(92.39±31.88)％,U251细胞株中升高(250.25±60.37)％,U87细胞株中升高(128.44±25.11)％.转染后HOXB1蛋白水平的变化也得出了相类似的结果.结论 HOXB1基因3-UTR为miR-3175调控直接靶点,并且miR-3175 mimics为靶向负调控,miR-3175 inhibitor为靶向正调控.
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