分泌抗A型魏氏梭菌肠毒素单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和初步应用

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魏氏梭菌S020718培养物,用超声波裂解细胞,离心,取上淸液,即为粗制CPE;再经硫酸铵盐析、凝胶过虑 ,获得纯化的蛋白含量为2.335mg/ml CPE。该纯化CPE对小白鼠的半数致死量为2.5ug/只;该CPE豚鼠皮肤蓝斑单位为2500-4000;引起新西兰白兔小肠积液的最小毒素量为25ug。将纯化的CPE,在含0.4%福尔马林的的PB液中透析制备类毒素。用类毒素和CPE与弗氏佐剂完全乳化后,免疫BABL/C小鼠,取免疫鼠脾细胞和 NSO骨髓瘤细胞用聚乙二醇(PEG 4000)进行细胞融合,经有限稀释法克隆和亚克隆,获得2株能稳定分泌抗CPE单克隆抗体的杂交瘤细胞株,定名为1D5、2B4。经鉴定,这两株杂交瘤细胞的平均染色体数目为96.8条,稳定性良好,单抗亚类为IgG1。杂交瘤细胞培养上清的效价1D5为1:2048,2B4为1:1024;腹水单克隆抗体的效价1D5为1:204800,2B4为1:51200,与其他几种常见的毒素SE、LT、S-LT等不存在交叉反应。1D5能完全中和NCTC8239、S020718所产生的CPE的生物学活性,而2B4的中和活性则较差。建立了用McAb (1D5)包被酶标板检测CPE的ELISA方法,1D5单抗的最佳稀释度为1:400(2. 5μg/ml), 兔抗CPE高免血清的最佳稀释度为1:400。最低检出量为0.92ng/ml,该方法不受培养基、粪便及食物的影响,灵敏度高,特异性强,对于临床和食品卫生检验将是一种简便、可靠的检测方法。
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