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[摘要] 目的 探讨洋葱伯克霍尔德菌感染的临床分布特点及其耐药情况。 方法 对本院2010～2012年临床分离的103株洋葱伯克霍尔德菌，采用Mcroscan WalkAway 96SI全自动细菌分析仪进行鉴定和药敏试验，对菌株的样本来源、病区分布以及对常用抗生素的耐药率进行统计分析。 结果 洋葱伯克霍尔德菌检出株数逐年增长；洋葱伯克霍尔德菌样本来源主要为痰液（82.5%），其次为血液（8.7%），并且感染患者多为中老年男性；ICU病房的洋葱伯克霍尔德菌分离率最高（77.7%）；洋葱伯克霍尔德菌对于常用抗菌药物有严重的多重耐药性，且其耐药性有逐年上升的趋势。洋葱伯克霍尔德菌对米诺环素和复方新诺明较为敏感，对氨基糖甙类抗生素呈现出100%的耐药性，对亚胺培南、三代头孢、特治星与喹诺酮类抗生素也呈现高度耐药性。 结论 洋葱伯克霍尔德菌的临床检出率呈逐年增长趋势，并且多重耐药严重，应加强监测，合理选用抗菌药物，米诺环素和复方新诺明可作为经验性治疗洋葱伯克霍尔德菌感染的首选药物。
[关键词] 洋葱伯克霍尔德菌；临床分布；耐药性
[中图分类号] R446.5 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2015）06-200-04
Clinical analysis and drug resistance analysis of burkholderia cepacia
ZHU Jianping ZHONG Jincheng LIN Dingzhong
Huizhou Skin Disease Prevention and Treatment Institute，Huizhou 516001，China
[Abstract] Objective To explore the clinical distribution feature and drug resistance of Burkholderia cepacia. Methods A total of 103 Burkholderia cepacia strains were isolated from our hospital from 2010 to 2012.Bacterial identification and antibiotic susceptibility testing were carried out using Mcroscan WalkAway 96SI automatic bacteria analyzer.And the sample source，the clinical distribution and the drug resistance rate to common antibiotics of Burkholderia cepacia were analyzed. Results Burkholderia cepacia strains were growing year by year；Sputum was the main source of Burkholderia cepacia（82.5%），followed by blood（8.7%），and most of infected persons were male；Burkholderia cepacia showed severe multidrug resistance to multiple antibiotics，and the drug resistance had a tendency to rise year by year.Burkholderia cepacia was very sensitive to Minocycline and Bactrim，the drug resistance rate of Burkholderia cepacia to aminoglycosides antibiotics was 100%，and Burkholderia cepacia also showed high drug resistance rate to Imipenem，the third generation cephalosporin，Tazocin and Quinolone antibiotics. Conclusion The isolation rate of Burkholderia cepacia is growing year by year.Burkholderia cepacia is very resistant to multiple antibiotics.The observation should be enhanced，and the selection of antibiotics should be more rational.Minocycline and Bactrim can be the priority drugs for the treantmen of infection of Burkholderia cepacia in the clinical experience.
[Key words] Burkholderia cepacia；Clinical distribution；Drug resistance
洋葱伯克霍尔德菌（burkholderia cepacia，BC）原名为洋葱假单细胞菌，因引起洋葱球茎腐烂而得名，1992年归为伯克霍尔德菌属[1]。20世纪40年代末期，其作为植物病原菌被广泛认识，1971年首次有引起人类感染的报道。据报道，北美一些医院20世纪70年代中期洋葱伯克霍尔德菌的临床检出率仅10%，80年代中期起检出率达到40%[2]。洋葱伯克霍尔德菌广泛存在于自然界和医院的环境中，是一种人类条件性致病菌。洋葱伯克霍尔德菌感染是一种难治的细菌感染性疾病，在医院内并不常见，主要在住院患者入院中后期发现，以老年男性患者为主。在临床上较为难治，严重影响患者的生存质量，并大大增加了患者家庭的经济负担。随着近年来各种侵袭性操作和免疫功能低下患者的增多，其临床分离率也日益增加，耐药率逐年增高。在本研究中，我们对本院2010～ 2012年临床分离的103株洋葱伯克霍尔德菌进行鉴定和药敏试验，并对菌株的样本来源、病区分布以及对常用抗生素的耐药率进行统计分析，探讨洋葱伯克霍尔德菌感染的临床分布特点及其耐药情况，现将结果报道如下。 1 资料与方法
1.1 菌株来源
选取2010年1月～2012年12月从本院门诊以及病区患者的各类样本中分离出的103株洋葱伯克霍尔德菌，排除同一患者相同感染部位分离的重复菌株。
1.2 仪器和试剂
仪器为美国德灵公司生产的Mcroscan WalkAway 96SI全自动细菌分析仪，试剂为美国德灵公司配套产品NC21及NBPC12、NC31鉴定药敏复合板。
1.3 质控菌株
大肠埃希ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853。
1.4 培养和鉴定方法
按照《全国临床检验操作规程》进行菌株分离，将培养标本按常规培养方法及时接种于血平板、巧克力平板和中国兰平板，血培养放入血培养仪做前期培养，阳性时转种以上平板。对于35℃培养24h长出黄色、光滑、圆形、凸起、边缘整齐、中等大小菌落进行革兰染色、氧化酶及葡萄糖氧化发酵试验，用Mcroscan WalkAway 96SI全自动细菌分析仪进行鉴定和药敏试验。
1.5 统计学方法
采用WHONET5.4软件进行分析。
2 结果
2.1 洋葱伯克霍尔德菌每年检出情况分析
103株洋葱伯克霍尔德菌中，2010年检出25株，占24.2%，2011年检出34株，占33.0%，2012年检出44株，占42.7%，检出株数逐年增长，见图1。
2.2 洋葱伯克霍尔德菌样本来源分布分析
103株洋葱伯克霍尔德菌，主要来源于痰液样本，85株，占82.5%，6株来源于血液样本，占8.7%，其他依次为3株伤口分泌物标本，2株尿液样本，以及脑脊液、导管尖端、骨髓、腹水样本各1株，见图2；从洋葱伯克霍尔德菌感染患者情况看，男性患者占77.7%，女性患者占22.3%；从患者年龄方面观察，以中老年患者洋葱伯克霍尔德菌感染率最高，50岁以上患者占84.5%。
2.3 洋葱伯克霍尔德菌临床科室分布分析
洋葱伯克霍尔德菌在临床科室的分布以ICU（包括内科ICU，外壳ICU，急诊ICU）最高，80株，占77.7%，其他依次为呼吸内科6株，占5.8%，神经内科6株，占5.8%，中医康复科4株，占3.9%，血液内科3株，占2.9%，以及肾内科、心血管内科、骨外科、妇产科各1株，占1.0%，见图3。
2.4 洋葱伯克霍尔德菌对14种抗生素的药敏试验
洋葱伯克霍尔德菌对于常用抗菌药物有严重的多重耐药性，洋葱伯克霍尔德菌对米诺环素和复方新诺明较为敏感，对氨基糖甙类抗生素呈现出100%的耐药性，对亚胺培南、三代头孢、特治星与喹诺酮类抗生素均呈现高度耐药性，见表1。
2.5 洋葱伯克霍尔德菌耐药率及变化趋势
洋葱伯克霍尔德菌耐药率有逐年递增的趋势，其中头孢他啶的耐药率升高的趋势较为明显，见表2。
3 讨论
洋葱伯克霍尔德菌广泛分布在自然界的水、土壤和植物中，可通过污染水、消毒液及导管等而导致多种医院感染[3]，如肺炎、败血症、伤口感染和深部脓肿等，对于免疫力低下患者，更容易引起感染。本研究结果显示，洋葱伯克霍尔德菌检出株数逐年增长，其样本来源主要为痰液，其次为血液，并且感染患者多为中老年男性，ICU患者。这些患者均患有严重的基础疾病，免疫能力低下，但大部分患者是在住院期间经呼吸道感染了洋葱伯克霍尔德菌，主要原因是机械通气、气管切开、导管留置及深静脉穿刺等侵入性操作，该情况下更可能导致多重混合感染，加重病情[4-7]。治疗洋葱伯克霍尔德菌感染患者应采用综合治疗，侵入性操作前应严格消毒，及时引流痰液，可疑深静脉导管及时拔除，勤换呼吸及管路，提高患者自身免疫能力，努力减少医源性的感染。
感染后因细菌的多重耐药及缺少有效的抗菌药而治疗比较困难[8-9]，应引起临床的重视。洋葱伯克霍尔德菌耐药机制极其复杂，对多种抗菌药物天然耐药，是一种天然的多重耐药病原菌。洋葱伯克霍尔德菌既有其固有耐药机制，天然耐氨基糖苷类抗生素；又有后天获得性耐药机制，如产生头孢菌素酶、金属β-内酰胺酶、膜通透性下降以及外排泵等，对三代头孢及亚胺培南有耐药性[10-12]。本研究结果显示：洋葱伯克霍尔德菌对于常用抗菌药物有严重的多重耐药性，且其耐药性有逐年上升的趋势。洋葱伯克霍尔德菌对米诺环素和复方新诺明较为敏感，而对氨基糖甙类抗生素呈现出100%的耐药性，对亚胺培南、三代头孢、特治星与喹诺酮类抗生素也呈现高度耐药性，研究结果与耐药机制一致。其中头孢他啶的耐药率由2010年的28.0%上升至2012年的81.8%，可能与患者长期大剂量使用该抗生素有关。对于感染的重症患者而言，医生应及时根据药敏试验选取合适的抗菌药物，米诺环素和复方新诺明对洋葱伯克霍尔德菌有较高的抗菌活性，这两种抗生素可作为治疗感染的首选药物。
综上所述，洋葱伯克霍尔德菌的临床检出率呈逐年增长趋势，并且多重耐药严重，应加强监测，减少医源性感染，合理选用抗菌药物，米诺环素和复方新诺明可作为经验性治疗洋葱伯克霍尔德菌感染的首选药物。
[参考文献]
[1] Murray PR，Baron EJ，Pfaller MA，et a1.Manual of clinical microbiology 7th edition[M].Washington Dc：American Society for Microbiology，1999：526-538.
[2] Coenye T，Vandamne P，Govan JR，et al.Taxonomy and identification of Burkhokderia cepacia complex[J].J Chin Microboil，2001，39（10）：3427-3436. [3] Kaitwatcharachai C，Silpapojakul K，Jitsurong S，et al. Anoutbreak of Burkhokderia cepacia bactercmia in hemodialysis patients：an epidemiologic and molecular study[J].Am J Kidney Dis，2000，36（1）：199-204.
[4] 王宏伟，李霞，许俊华，等.127株洋葱伯克霍尔德菌感染特点及耐药性分析[J].中华医院感染学杂志，2012，22（9）：1936.
[5] Coenye T，Vandamme P，Govan JR，et a1.Taxonomy and identification of the Burkhokderia cepacia complex[J].J Clin Microbiol，2001，39（10）：3427-3436.
[6] 李军，宗春光，杨亚平，等.老年患者洋葱伯克霍尔德菌感染耐药性分析[J]. 中国老年学杂志， 2012， 32（22）： 4981-4982.
[7] 车惠琴， 从宏亮， 朱光明.洋葱伯克霍尔德菌的临床监测及耐药性变异[J].中华医院感染学杂志，2011，21（6）：1473-1475.
[8] 马静霞，黄志刚.洋葱伯克霍尔德菌感染现状及耐药分析[J].中国卫生检验杂志，2011，21（6）：1473-1475.
[9] 王曼，张丽杰，夏生林，等.洋葱伯克霍尔德菌污染B超耦合剂致剖宫产术后切口感染的调查[J].中华流行病学杂志，2014，（5）：566-568.
[10] 吴奎海，孙静静，陈清，等.洋葱伯克霍尔德菌整合子Ⅰ和ISCR1分布及ERIC-PCR分型[J].广东医学，2011，32（12）：1538-1540.
[11] 李军，宗春光，王兆鹏，等.老年患者洋葱伯克霍尔德菌感染的危险因素及药敏分析[J].中国老年学杂志，2013，33（13）：3079-3080.
[12] 李汨，廖学峰.ICU患者医院获得性感染洋葱伯克霍尔德菌的临床特征及耐药性分析[J].国际检验医学杂志，2014（20）：2769-2770，2772.
（收稿日期：2014-12-08）
[关键词] 洋葱伯克霍尔德菌；临床分布；耐药性
[中图分类号] R446.5 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2015）06-200-04
Clinical analysis and drug resistance analysis of burkholderia cepacia
ZHU Jianping ZHONG Jincheng LIN Dingzhong
Huizhou Skin Disease Prevention and Treatment Institute，Huizhou 516001，China
[Abstract] Objective To explore the clinical distribution feature and drug resistance of Burkholderia cepacia. Methods A total of 103 Burkholderia cepacia strains were isolated from our hospital from 2010 to 2012.Bacterial identification and antibiotic susceptibility testing were carried out using Mcroscan WalkAway 96SI automatic bacteria analyzer.And the sample source，the clinical distribution and the drug resistance rate to common antibiotics of Burkholderia cepacia were analyzed. Results Burkholderia cepacia strains were growing year by year；Sputum was the main source of Burkholderia cepacia（82.5%），followed by blood（8.7%），and most of infected persons were male；Burkholderia cepacia showed severe multidrug resistance to multiple antibiotics，and the drug resistance had a tendency to rise year by year.Burkholderia cepacia was very sensitive to Minocycline and Bactrim，the drug resistance rate of Burkholderia cepacia to aminoglycosides antibiotics was 100%，and Burkholderia cepacia also showed high drug resistance rate to Imipenem，the third generation cephalosporin，Tazocin and Quinolone antibiotics. Conclusion The isolation rate of Burkholderia cepacia is growing year by year.Burkholderia cepacia is very resistant to multiple antibiotics.The observation should be enhanced，and the selection of antibiotics should be more rational.Minocycline and Bactrim can be the priority drugs for the treantmen of infection of Burkholderia cepacia in the clinical experience.
[Key words] Burkholderia cepacia；Clinical distribution；Drug resistance
洋葱伯克霍尔德菌（burkholderia cepacia，BC）原名为洋葱假单细胞菌，因引起洋葱球茎腐烂而得名，1992年归为伯克霍尔德菌属[1]。20世纪40年代末期，其作为植物病原菌被广泛认识，1971年首次有引起人类感染的报道。据报道，北美一些医院20世纪70年代中期洋葱伯克霍尔德菌的临床检出率仅10%，80年代中期起检出率达到40%[2]。洋葱伯克霍尔德菌广泛存在于自然界和医院的环境中，是一种人类条件性致病菌。洋葱伯克霍尔德菌感染是一种难治的细菌感染性疾病，在医院内并不常见，主要在住院患者入院中后期发现，以老年男性患者为主。在临床上较为难治，严重影响患者的生存质量，并大大增加了患者家庭的经济负担。随着近年来各种侵袭性操作和免疫功能低下患者的增多，其临床分离率也日益增加，耐药率逐年增高。在本研究中，我们对本院2010～ 2012年临床分离的103株洋葱伯克霍尔德菌进行鉴定和药敏试验，并对菌株的样本来源、病区分布以及对常用抗生素的耐药率进行统计分析，探讨洋葱伯克霍尔德菌感染的临床分布特点及其耐药情况，现将结果报道如下。 1 资料与方法
1.1 菌株来源
选取2010年1月～2012年12月从本院门诊以及病区患者的各类样本中分离出的103株洋葱伯克霍尔德菌，排除同一患者相同感染部位分离的重复菌株。
1.2 仪器和试剂
仪器为美国德灵公司生产的Mcroscan WalkAway 96SI全自动细菌分析仪，试剂为美国德灵公司配套产品NC21及NBPC12、NC31鉴定药敏复合板。
1.3 质控菌株
大肠埃希ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853。
1.4 培养和鉴定方法
按照《全国临床检验操作规程》进行菌株分离，将培养标本按常规培养方法及时接种于血平板、巧克力平板和中国兰平板，血培养放入血培养仪做前期培养，阳性时转种以上平板。对于35℃培养24h长出黄色、光滑、圆形、凸起、边缘整齐、中等大小菌落进行革兰染色、氧化酶及葡萄糖氧化发酵试验，用Mcroscan WalkAway 96SI全自动细菌分析仪进行鉴定和药敏试验。
1.5 统计学方法
采用WHONET5.4软件进行分析。
2 结果
2.1 洋葱伯克霍尔德菌每年检出情况分析
103株洋葱伯克霍尔德菌中，2010年检出25株，占24.2%，2011年检出34株，占33.0%，2012年检出44株，占42.7%，检出株数逐年增长，见图1。
2.2 洋葱伯克霍尔德菌样本来源分布分析
103株洋葱伯克霍尔德菌，主要来源于痰液样本，85株，占82.5%，6株来源于血液样本，占8.7%，其他依次为3株伤口分泌物标本，2株尿液样本，以及脑脊液、导管尖端、骨髓、腹水样本各1株，见图2；从洋葱伯克霍尔德菌感染患者情况看，男性患者占77.7%，女性患者占22.3%；从患者年龄方面观察，以中老年患者洋葱伯克霍尔德菌感染率最高，50岁以上患者占84.5%。
2.3 洋葱伯克霍尔德菌临床科室分布分析
洋葱伯克霍尔德菌在临床科室的分布以ICU（包括内科ICU，外壳ICU，急诊ICU）最高，80株，占77.7%，其他依次为呼吸内科6株，占5.8%，神经内科6株，占5.8%，中医康复科4株，占3.9%，血液内科3株，占2.9%，以及肾内科、心血管内科、骨外科、妇产科各1株，占1.0%，见图3。
2.4 洋葱伯克霍尔德菌对14种抗生素的药敏试验
洋葱伯克霍尔德菌对于常用抗菌药物有严重的多重耐药性，洋葱伯克霍尔德菌对米诺环素和复方新诺明较为敏感，对氨基糖甙类抗生素呈现出100%的耐药性，对亚胺培南、三代头孢、特治星与喹诺酮类抗生素均呈现高度耐药性，见表1。
2.5 洋葱伯克霍尔德菌耐药率及变化趋势
洋葱伯克霍尔德菌耐药率有逐年递增的趋势，其中头孢他啶的耐药率升高的趋势较为明显，见表2。
3 讨论
洋葱伯克霍尔德菌广泛分布在自然界的水、土壤和植物中，可通过污染水、消毒液及导管等而导致多种医院感染[3]，如肺炎、败血症、伤口感染和深部脓肿等，对于免疫力低下患者，更容易引起感染。本研究结果显示，洋葱伯克霍尔德菌检出株数逐年增长，其样本来源主要为痰液，其次为血液，并且感染患者多为中老年男性，ICU患者。这些患者均患有严重的基础疾病，免疫能力低下，但大部分患者是在住院期间经呼吸道感染了洋葱伯克霍尔德菌，主要原因是机械通气、气管切开、导管留置及深静脉穿刺等侵入性操作，该情况下更可能导致多重混合感染，加重病情[4-7]。治疗洋葱伯克霍尔德菌感染患者应采用综合治疗，侵入性操作前应严格消毒，及时引流痰液，可疑深静脉导管及时拔除，勤换呼吸及管路，提高患者自身免疫能力，努力减少医源性的感染。
感染后因细菌的多重耐药及缺少有效的抗菌药而治疗比较困难[8-9]，应引起临床的重视。洋葱伯克霍尔德菌耐药机制极其复杂，对多种抗菌药物天然耐药，是一种天然的多重耐药病原菌。洋葱伯克霍尔德菌既有其固有耐药机制，天然耐氨基糖苷类抗生素；又有后天获得性耐药机制，如产生头孢菌素酶、金属β-内酰胺酶、膜通透性下降以及外排泵等，对三代头孢及亚胺培南有耐药性[10-12]。本研究结果显示：洋葱伯克霍尔德菌对于常用抗菌药物有严重的多重耐药性，且其耐药性有逐年上升的趋势。洋葱伯克霍尔德菌对米诺环素和复方新诺明较为敏感，而对氨基糖甙类抗生素呈现出100%的耐药性，对亚胺培南、三代头孢、特治星与喹诺酮类抗生素也呈现高度耐药性，研究结果与耐药机制一致。其中头孢他啶的耐药率由2010年的28.0%上升至2012年的81.8%，可能与患者长期大剂量使用该抗生素有关。对于感染的重症患者而言，医生应及时根据药敏试验选取合适的抗菌药物，米诺环素和复方新诺明对洋葱伯克霍尔德菌有较高的抗菌活性，这两种抗生素可作为治疗感染的首选药物。
综上所述，洋葱伯克霍尔德菌的临床检出率呈逐年增长趋势，并且多重耐药严重，应加强监测，减少医源性感染，合理选用抗菌药物，米诺环素和复方新诺明可作为经验性治疗洋葱伯克霍尔德菌感染的首选药物。
[参考文献]
[1] Murray PR，Baron EJ，Pfaller MA，et a1.Manual of clinical microbiology 7th edition[M].Washington Dc：American Society for Microbiology，1999：526-538.
[2] Coenye T，Vandamne P，Govan JR，et al.Taxonomy and identification of Burkhokderia cepacia complex[J].J Chin Microboil，2001，39（10）：3427-3436. [3] Kaitwatcharachai C，Silpapojakul K，Jitsurong S，et al. Anoutbreak of Burkhokderia cepacia bactercmia in hemodialysis patients：an epidemiologic and molecular study[J].Am J Kidney Dis，2000，36（1）：199-204.
[4] 王宏伟，李霞，许俊华，等.127株洋葱伯克霍尔德菌感染特点及耐药性分析[J].中华医院感染学杂志，2012，22（9）：1936.
[5] Coenye T，Vandamme P，Govan JR，et a1.Taxonomy and identification of the Burkhokderia cepacia complex[J].J Clin Microbiol，2001，39（10）：3427-3436.
[6] 李军，宗春光，杨亚平，等.老年患者洋葱伯克霍尔德菌感染耐药性分析[J]. 中国老年学杂志， 2012， 32（22）： 4981-4982.
[7] 车惠琴， 从宏亮， 朱光明.洋葱伯克霍尔德菌的临床监测及耐药性变异[J].中华医院感染学杂志，2011，21（6）：1473-1475.
[8] 马静霞，黄志刚.洋葱伯克霍尔德菌感染现状及耐药分析[J].中国卫生检验杂志，2011，21（6）：1473-1475.
[9] 王曼，张丽杰，夏生林，等.洋葱伯克霍尔德菌污染B超耦合剂致剖宫产术后切口感染的调查[J].中华流行病学杂志，2014，（5）：566-568.
[10] 吴奎海，孙静静，陈清，等.洋葱伯克霍尔德菌整合子Ⅰ和ISCR1分布及ERIC-PCR分型[J].广东医学，2011，32（12）：1538-1540.
[11] 李军，宗春光，王兆鹏，等.老年患者洋葱伯克霍尔德菌感染的危险因素及药敏分析[J].中国老年学杂志，2013，33（13）：3079-3080.
[12] 李汨，廖学峰.ICU患者医院获得性感染洋葱伯克霍尔德菌的临床特征及耐药性分析[J].国际检验医学杂志，2014（20）：2769-2770，2772.
（收稿日期：2014-12-08）