一种新的重组腺病毒载体pAdBM5-GFP-mAFP的构建

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目的构建表达小鼠甲胎蛋白(murine alpha fetoprotein,mAFP)基因的重组腺病毒载体pAd—BM5-GFP-mAFP,并测定其滴度。方法从Hepal-6小鼠肝癌细胞中提取总RNA,设计特异性引物,通过RT-PCR法扩增mAFP基因,测序确认后,插入到pAdBM5-GFP穿梭载体中,双酶切鉴定重组腺病毒载体。线性化重组腺病毒载体与病毒骨架DNA质粒用磷酸钙共沉淀法共转染HEK293A细胞,通过同源重组使腺病毒表达mAFP基因,并在HEK293A细胞中大量扩增含目的基因的重组腺病毒,用T
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