3＊Flag-hSesn1重组质粒的构建及其在骨肉瘤细胞中的表达

来源 :现代肿瘤医学 | 被引量 : 0次 | 上传用户：ppt1000

【摘要】

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目的：构建3＊Flag-hSesn1真核表达载体并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法：以GSThSesn1为模板,利用聚合酶链反应扩增hSesn1基因cDNA全长,并将其克隆至3＊Flag标签的真核表达载

【作者】

：

沈涛郭然李妍巴根杨蕾郭洲洋陈之光付勤

【机构】

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中国医科大学附属盛京医院骨科,中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室

【出处】

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现代肿瘤医学

【发表日期】

：

2017年9期

【关键词】

：

hSesn1 WESTERN BLOT 免疫沉淀 hSesn1 Western blot immunoprecipitation

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目的：构建3＊Flag-hSesn1真核表达载体并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法：以GSThSesn1为模板,利用聚合酶链反应扩增hSesn1基因cDNA全长,并将其克隆至3＊Flag标签的真核表达载体中。将构建的重组载体进行双酶切和测序鉴定,并转染到MG-63骨肉瘤细胞中,提取总蛋白进行Western blot检测。进一步利用共聚焦激光显微镜观察3＊Flag-hSesn1在MG-63细胞中的定位,使用免疫沉淀的方法纯化人源Sesn1蛋白。结果：hSesn1基因的cDNA全长成功构建到3＊Flag标

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