【摘 要】
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目的建立新生儿疾病筛查血片DNA提取的方法，探索其在甲基化检测中的应用。方法依据性别随机将新生儿出生时的血片样本20例分为2组：传统法组(10例)、改良试剂盒法组(10例)。从DNA浓度、完整性和是否适应于聚合酶链反应(PCR)研究，对抽提的DNA质量进行评估。进一步对DNA做重亚硫酸盐处理，采用甲基化特异性PCR(MSP)法检测瘦素(Leptin)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因启动子区域甲
【机 构】
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210004 南京医科大学附属南京妇幼保健院儿科,210004 南京医科大学附属南京妇幼保健院医学研究中心,210004 南京医科大学附属南京妇幼保健院医学研究中心,210004 南京医科大学附属南京
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目的建立新生儿疾病筛查血片DNA提取的方法，探索其在甲基化检测中的应用。
方法依据性别随机将新生儿出生时的血片样本20例分为2组：传统法组(10例)、改良试剂盒法组(10例)。从DNA浓度、完整性和是否适应于聚合酶链反应(PCR)研究，对抽提的DNA质量进行评估。进一步对DNA做重亚硫酸盐处理，采用甲基化特异性PCR(MSP)法检测瘦素(Leptin)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因启动子区域甲基化水平变化。
结果改良试剂盒法抽提的DNA浓度为(5.70±0.81)mg/L，显著优于传统法[(3.50±0.45) mg/L](t＝2.79，P<0.05)；生化分析仪分析显示DNA片段完整性更好。琼脂糖凝胶电泳显示可以扩增出有效的18S基因PCR片段，说明抽提的DNA可以用于PCR相关实验研究；MSP结果显示不同血片样本甲基化Leptin、TNF-α基因启动子区域甲基化模式不同。
结论改良试剂盒方法可以简便有效地从干血片中提取DNA，而且抽提的DNA可以较好地用于基因甲基化研究；为从DNA甲基化的角度揭示疾病的发生，提供了新的研究方案和技术方法。
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