【摘 要】
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水稻P450基因家族成员CYP81A6参与稻瘟病抗性反应,为了深入研究该基因的功能,本研究利用3次克隆的策略构建了该基因的RNAi载体.首先设计带有酶切位点的基因特异性引物,以cDNA
【机 构】
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中南民族大学生命科学学院,武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室,生物技术国家民委重点实验室,武汉,430074
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水稻P450基因家族成员CYP81A6参与稻瘟病抗性反应,为了深入研究该基因的功能,本研究利用3次克隆的策略构建了该基因的RNAi载体.首先设计带有酶切位点的基因特异性引物,以cDNA为模板扩增3'非翻译区的特异片断,将目的产物连接到T载体上,经菌落PCR和酶切鉴定后进行测序.测序结果表示,目的片断已正确克隆到T载体上.然后利用双酶切通过2次亚克隆将目的片断以反向重复克隆到RNAi载体ds1301,通过分子检测表明,CYP81A6的RNAi载体构建成功,有助于后续的基因功能和作用机理的研究.
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