腺病毒介导的人骨形态发生蛋白-7基因转染大鼠骨髓基质干细胞及其表达

来源 :中华地方病学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gordontang530
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目的 利用人骨形态发生蛋白-7(hBMP-7)腺病毒表达载体(Ad-hBMP-7)转染大鼠骨髓基质干细胞(BMSC)的方法,观察Ad-hBMP-7转染后对BMSC分化的影响,探讨基冈治疗的可能性.方法 获取Wistar大鼠BMSC,并分为3组:Ad-hBMP-7转染组、Ad-绿色荧光蛋白(Ad-GFP)转染组、未转染组.将Ad-hBMP-7和Ad-GFP的病毒液分别转染体外培养的大鼠BMSC,用RT-PCR法检测hBMP-7 mRNA的表达,7 d后用Western blot法检测hBMP-7的蛋白表达,同时进行碱性磷酸酶(ALP)染色.结果 在Ad-hBMP-7转染组,RT--PCR可检测到hBMP-7 mRNA的表达(470 bp),Western blot可检测到hBMP-7蛋白分泌(相对分子质量为15×103),转染后第10天ALP染色多数细胞-胞浆呈棕黑色阳性着色;而Ad-GFP转染组和未转染组ALP染色阳性细胞少见并且未检测到hBMP-7蛋白分泌.结论 Ad-hBMP-7基因可高效转染BMSC,促进BMSC向成骨细胞转化,为利用hBMP-7开展局部基因治疗的研究奠定了基础。

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