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摘要 为了解竹醋铜制剂对烟草黑胫病菌的抑制效果，采用室内抑菌试验研究了竹醋铜制剂对黑胫病的抑制作用。结果表明，竹醋铜制剂50～200倍液处理对黑胫病病菌的抑制效果较显著；400倍液处理的抑制效果较差，与未添加竹醋铜制剂的对照处理的差异不明显。因此，竹醋铜制剂作为一种新型绿色药剂，对烟草黑胫病菌具有一定的防效。
关键词 烟草黑胫病；竹醋铜制剂；抑菌效果
中图分类号 S435.72；S481 .9 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2018）03-0129-02
Abstract To understand the inhibition effect of bamboo vinegar reunited copper on tobacco black shank，indoor antibacterial test was carried out in this paper.The results showed that 50-200 times treatment had a significant inhibition effect on the black shank.400 times treatment was less effective，and there was no significant difference between it and the control.Therefore，as a new kind of green medicament，bamboo vinegar reunited copper is effective against tobacco black shank.
Key words tobacco black shank；bamboo vinegar reunited copper；inhibition effect
烟草黑胫病属于土传真菌性病害[1]，分布广泛，在我国各大烟区均有不同程度的发生，并多与烟草青枯病混合发生，对烟叶生产造成了巨大的经济损失[2]，仅次于烟草花叶病毒病。据统计，我国平均每年因其造成的经济损失达1亿元以上[3]。目前，针对该病大部分烟区仍然采用化学药剂防治手段[4]，尽管通过此种方法在短时间内收效明显，但却存在诸多弊端，例如长期单一、大量、重复地使用化学药剂，会造成“3R”问题[5]。这不仅会增加后续防治难度及成本，还会破坏生态环境甚至危及人类健康。竹醋液是一种天然无公害制剂[6]，不仅具有杀虫[7]和抑菌的作用[8]，还可提高药效[9]。铜制剂具有杀菌效果好、低毒、环保等优点[10]，但却容易产生毒害，例如当硫酸铜形成含水铜大于10 mg/L时会危害作物生长[11]。因此，利用竹醋液对药剂的增效作用，将硫酸铜与竹醋液混合，能够有效降低单一铜制剂的用量，避免对作物的伤害，同时又不降低药效，而且药剂的原料满足有机生产标准[12]。据相关研究表明，竹醋液复合铜能有效抑制番茄软腐病菌丝的生长，治疗效果达到58.63%，而预防效果则高达77.72%[13]。竹醋液复合硅溶液对番茄叶霉病菌丝生长抑制率达46.57%，防效达53.45%，显著高于单一的竹醋液[14]。竹醋铜制剂能够有效降低其他作物的真菌性病害发生，关于烟草上此类病害的研究尚无报道。因此，笔者深入研究竹醋铜制剂对烟草黑胫病菌室内抑制效果，旨在寻找有效、经济的抑制浓度，以期为在烟草病害防治中替代化学药剂的筛选提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
培养基：LAB培养基（利马豆：70 g，琼脂粉：20 g、去离子水：1 000 mL）。竹醋液：浙江省遂昌县文照竹炭责任有限公司生产（密度1.006 g/mL，pH值2.62，醋酸含量4.54%）。硫酸铜：分析纯，国药集团化学试剂有限公司。竹醋铜制剂：将硫酸铜与竹醋液在一定工艺条件下螯合形成，其中无机铜离子浓度为0.1 mol/L。
1.2 试验方法
用去离子水将竹醋铜制剂分别稀释为50倍液、100倍液、200倍液和400倍液，其无机铜离子含量分别为20.0、10.0、5.0、2.5 mmol/L。将配制好的LAB培养基装入三角瓶中，每瓶定容到100 mL，高温灭菌后待培养基温度下降到60 ℃左右时，分别从低浓度到高浓度加入50 mL配制好的各浓度药液（同上），摇匀后制成系列浓度的含药培养基，将其倒入直径为9 cm的培养基中，每个处理重复3次，以加无菌水的处理作空白对照。在无菌条件下用打孔器（10 mm）在LAB平板上培养的烟草黑胫病菌菌落边缘打出菌饼（培育时间一致）。待上述培养基冷却后，在每皿中央以菌面朝下接入1个菌饼，然后放入28 ℃恒温培养箱中培养7 d。用十字交叉法测量菌落直径，计算其抑制率：
抑制率（%）=[（空白对照菌落直径-10 mm）-（处理菌落直径-10mm）]÷（空白对照菌落直径-10 mm）×100
1.3 数据分析
试验数据采用Microsoft Excel 2003和SPSS.17.0进行单因素方差分析。
2 结果与分析
由表1和图1均可看出，竹醋铜制剂对黑胫病具有一定的抑制作用，且随着铜离子浓度的增加抑制作用增强。50倍液处理的抑制作用非常明显，菌圈直径较CK减少54.6 mm，差异显著，抑制率达到84.54%；但是当其大于100倍液时，抑制效果明显减弱；在400倍液时，与CK无显著差异。
3 结论与讨论
罗 敏等[15]研究结果显示，竹醋液与黄连、厚朴复配后产生明显的增效作用；王文杰[16]发现竹醋液与其他药物辅配后可产生明显的增效作用；李德广[17]试验发现，氨基酸螯合硫酸铜能够形成一种具有杀菌和肥料双重作用的有机药肥，对黄瓜霜霉病防效达到74.88%，对番茄灰霉病防效达到 84.42%，对番茄晚疫病防效达到70.15%，均优于单一铜制剂；马建义等[18]研究表明，14%竹醋络氨铜制剂300倍液对水稻稻曲病的防效顯著高于20%三唑酮乳剂1 000倍液，说明竹醋液与硫酸铜、氨水络合能形成良好的杀菌剂。与本文室内抑菌试验得出的竹醋铜制剂50～200倍液对烟草黑胫病有显著防效的结果相似。铜制剂属于一种良好的杀菌剂，以波尔多液为例，其利用铜离子与病原菌体内活性集团结合产生铜的络合物等，使蛋白变性，从而抑制病菌代谢，致其死亡[19]。同时，竹醋液在农业生产中的应用已经证明，其不仅能促进作物生长，而且具有高效的杀菌效果。当二者混合后，形成竹醋铜溶液，通过竹醋液增效作用，可以显著提高杀菌能力。本试验仅探索竹醋铜制剂的室内抑菌效果，关于室外效果尚不清楚。由于外界环境因素复杂多变，往往造成与室内效果不符合的结果，降低推广应用的意义。因此，接下来应开展盆栽接菌抑制试验以及大田推广验证试验，以进一步探索竹醋铜制剂的促生效果与抗病效果协同作用最佳的比例。 本试验结果表明，竹醋铜制剂属于铜制剂与竹醋液的复合剂，其对烟草黑胫病有一定的抑制作用，适宜在今后的烟叶生产中试点及推广。
4 参考文献
[1] 谢永辉，张永贵，朱利全，等.烟草黑胫病综合防治研究进展[J].生物技术进展，2015，1（5）：41-46.
[2] 陈瑞泰，朱贤朝，王智发，等.全国16个主产烟省（区）烟草侵染性病害调研报告[J].中国烟草科学，1997（4）：1-7.
[3] 马国胜，高智谋，陈娟.烟草黑胫病菌研究进展[J].烟草科技，2003（4）：35-42.
[4] ZHU X C，WANG X T，WANG Z F. Chinese tobacco disease （in Chinese）[M].Beijing：China Agricultural Science Press，2002：64-75.
[5] 刘保才，王俊琪，孙国语.蔬菜病虫害化学防治中的3R问题与科学使用农药[J].上海蔬菜，2004（6）：69-71.
[6] 方楷，杨光耀，杨清培.竹醋液应用研究进展[J].林业科技开发，2007，21（6）：1-4.
[7] 姚远，陈正洲，洪科，等.竹醋液对番茄生长发育及桃蚜的影响[J].安徽农业大学学报，2012，39（4）：646-650.
[8] 韦强，杜相革，黄漫青.竹醋液对黄瓜霜霉病防治效果的研究[J].中国农学通报，2006，6（22）：330-332.
[9] 李小荣，吴全聪，刘志龙，等.竹醋液对几种杀虫剂的增效作用[J].浙江农业科学，2005（2）：144-146.
[10] 陈亮，张力群，刘君丽，等.植物细菌性病害与化学防治[C]//第六届中国植物病害化学防治学术研讨会论文集，2008：10-15.
[11] 王忠跃，耿俊云，丁建明，等.世界上铜制剂的发展[J].中外葡萄与葡萄酒，2001（3）：65-67.
[12] 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会.有机产品：GB/T 19630. 1-19630.4-2005[S].北京：中国标准出版社，2005.
[13] 周俊，杜相革.不同铜制剂对番茄软腐病防治效果的影响[J].北方园艺，2013（21）：135-138.
[14] 张志英，杜相革.竹醋液复合硅对番茄叶霉病菌室内抑菌效果的研究[J].中国农学通报，2012，28（24）：231-235.
[15] 罗敏，吴良如，高文惠，等.竹醋液抑菌及增效作用的研究[J].竹子研究汇刊，2004，23（2）：46-49.
[16] 王文杰.竹醋液促生长及对农药增效作用和防病效果的研究[D].合肥：安徽农业大学，2007.
[17] 李德廣.氨基酸铜对霜霉病、灰霉病和晚疫病作用及SOD酶的影响[D].北京：中国农业大学，2009.
[18] 马建义，王品维，廖文莉，等.竹醋液对络氨铜防治水稻稻曲病和纹枯病的增效作用[J].浙江农业科学，2009（2）：370-372.
[19] 王忠跃.铜制剂及在世界上的发展[J].中外葡萄与葡萄酒，2001（2）：34.
关键词 烟草黑胫病；竹醋铜制剂；抑菌效果
中图分类号 S435.72；S481 .9 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2018）03-0129-02
Abstract To understand the inhibition effect of bamboo vinegar reunited copper on tobacco black shank，indoor antibacterial test was carried out in this paper.The results showed that 50-200 times treatment had a significant inhibition effect on the black shank.400 times treatment was less effective，and there was no significant difference between it and the control.Therefore，as a new kind of green medicament，bamboo vinegar reunited copper is effective against tobacco black shank.
Key words tobacco black shank；bamboo vinegar reunited copper；inhibition effect
烟草黑胫病属于土传真菌性病害[1]，分布广泛，在我国各大烟区均有不同程度的发生，并多与烟草青枯病混合发生，对烟叶生产造成了巨大的经济损失[2]，仅次于烟草花叶病毒病。据统计，我国平均每年因其造成的经济损失达1亿元以上[3]。目前，针对该病大部分烟区仍然采用化学药剂防治手段[4]，尽管通过此种方法在短时间内收效明显，但却存在诸多弊端，例如长期单一、大量、重复地使用化学药剂，会造成“3R”问题[5]。这不仅会增加后续防治难度及成本，还会破坏生态环境甚至危及人类健康。竹醋液是一种天然无公害制剂[6]，不仅具有杀虫[7]和抑菌的作用[8]，还可提高药效[9]。铜制剂具有杀菌效果好、低毒、环保等优点[10]，但却容易产生毒害，例如当硫酸铜形成含水铜大于10 mg/L时会危害作物生长[11]。因此，利用竹醋液对药剂的增效作用，将硫酸铜与竹醋液混合，能够有效降低单一铜制剂的用量，避免对作物的伤害，同时又不降低药效，而且药剂的原料满足有机生产标准[12]。据相关研究表明，竹醋液复合铜能有效抑制番茄软腐病菌丝的生长，治疗效果达到58.63%，而预防效果则高达77.72%[13]。竹醋液复合硅溶液对番茄叶霉病菌丝生长抑制率达46.57%，防效达53.45%，显著高于单一的竹醋液[14]。竹醋铜制剂能够有效降低其他作物的真菌性病害发生，关于烟草上此类病害的研究尚无报道。因此，笔者深入研究竹醋铜制剂对烟草黑胫病菌室内抑制效果，旨在寻找有效、经济的抑制浓度，以期为在烟草病害防治中替代化学药剂的筛选提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
培养基：LAB培养基（利马豆：70 g，琼脂粉：20 g、去离子水：1 000 mL）。竹醋液：浙江省遂昌县文照竹炭责任有限公司生产（密度1.006 g/mL，pH值2.62，醋酸含量4.54%）。硫酸铜：分析纯，国药集团化学试剂有限公司。竹醋铜制剂：将硫酸铜与竹醋液在一定工艺条件下螯合形成，其中无机铜离子浓度为0.1 mol/L。
1.2 试验方法
用去离子水将竹醋铜制剂分别稀释为50倍液、100倍液、200倍液和400倍液，其无机铜离子含量分别为20.0、10.0、5.0、2.5 mmol/L。将配制好的LAB培养基装入三角瓶中，每瓶定容到100 mL，高温灭菌后待培养基温度下降到60 ℃左右时，分别从低浓度到高浓度加入50 mL配制好的各浓度药液（同上），摇匀后制成系列浓度的含药培养基，将其倒入直径为9 cm的培养基中，每个处理重复3次，以加无菌水的处理作空白对照。在无菌条件下用打孔器（10 mm）在LAB平板上培养的烟草黑胫病菌菌落边缘打出菌饼（培育时间一致）。待上述培养基冷却后，在每皿中央以菌面朝下接入1个菌饼，然后放入28 ℃恒温培养箱中培养7 d。用十字交叉法测量菌落直径，计算其抑制率：
抑制率（%）=[（空白对照菌落直径-10 mm）-（处理菌落直径-10mm）]÷（空白对照菌落直径-10 mm）×100
1.3 数据分析
试验数据采用Microsoft Excel 2003和SPSS.17.0进行单因素方差分析。
2 结果与分析
由表1和图1均可看出，竹醋铜制剂对黑胫病具有一定的抑制作用，且随着铜离子浓度的增加抑制作用增强。50倍液处理的抑制作用非常明显，菌圈直径较CK减少54.6 mm，差异显著，抑制率达到84.54%；但是当其大于100倍液时，抑制效果明显减弱；在400倍液时，与CK无显著差异。
3 结论与讨论
罗 敏等[15]研究结果显示，竹醋液与黄连、厚朴复配后产生明显的增效作用；王文杰[16]发现竹醋液与其他药物辅配后可产生明显的增效作用；李德广[17]试验发现，氨基酸螯合硫酸铜能够形成一种具有杀菌和肥料双重作用的有机药肥，对黄瓜霜霉病防效达到74.88%，对番茄灰霉病防效达到 84.42%，对番茄晚疫病防效达到70.15%，均优于单一铜制剂；马建义等[18]研究表明，14%竹醋络氨铜制剂300倍液对水稻稻曲病的防效顯著高于20%三唑酮乳剂1 000倍液，说明竹醋液与硫酸铜、氨水络合能形成良好的杀菌剂。与本文室内抑菌试验得出的竹醋铜制剂50～200倍液对烟草黑胫病有显著防效的结果相似。铜制剂属于一种良好的杀菌剂，以波尔多液为例，其利用铜离子与病原菌体内活性集团结合产生铜的络合物等，使蛋白变性，从而抑制病菌代谢，致其死亡[19]。同时，竹醋液在农业生产中的应用已经证明，其不仅能促进作物生长，而且具有高效的杀菌效果。当二者混合后，形成竹醋铜溶液，通过竹醋液增效作用，可以显著提高杀菌能力。本试验仅探索竹醋铜制剂的室内抑菌效果，关于室外效果尚不清楚。由于外界环境因素复杂多变，往往造成与室内效果不符合的结果，降低推广应用的意义。因此，接下来应开展盆栽接菌抑制试验以及大田推广验证试验，以进一步探索竹醋铜制剂的促生效果与抗病效果协同作用最佳的比例。 本试验结果表明，竹醋铜制剂属于铜制剂与竹醋液的复合剂，其对烟草黑胫病有一定的抑制作用，适宜在今后的烟叶生产中试点及推广。
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[1] 谢永辉，张永贵，朱利全，等.烟草黑胫病综合防治研究进展[J].生物技术进展，2015，1（5）：41-46.
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[8] 韦强，杜相革，黄漫青.竹醋液对黄瓜霜霉病防治效果的研究[J].中国农学通报，2006，6（22）：330-332.
[9] 李小荣，吴全聪，刘志龙，等.竹醋液对几种杀虫剂的增效作用[J].浙江农业科学，2005（2）：144-146.
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[11] 王忠跃，耿俊云，丁建明，等.世界上铜制剂的发展[J].中外葡萄与葡萄酒，2001（3）：65-67.
[12] 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会.有机产品：GB/T 19630. 1-19630.4-2005[S].北京：中国标准出版社，2005.
[13] 周俊，杜相革.不同铜制剂对番茄软腐病防治效果的影响[J].北方园艺，2013（21）：135-138.
[14] 张志英，杜相革.竹醋液复合硅对番茄叶霉病菌室内抑菌效果的研究[J].中国农学通报，2012，28（24）：231-235.
[15] 罗敏，吴良如，高文惠，等.竹醋液抑菌及增效作用的研究[J].竹子研究汇刊，2004，23（2）：46-49.
[16] 王文杰.竹醋液促生长及对农药增效作用和防病效果的研究[D].合肥：安徽农业大学，2007.
[17] 李德廣.氨基酸铜对霜霉病、灰霉病和晚疫病作用及SOD酶的影响[D].北京：中国农业大学，2009.
[18] 马建义，王品维，廖文莉，等.竹醋液对络氨铜防治水稻稻曲病和纹枯病的增效作用[J].浙江农业科学，2009（2）：370-372.
[19] 王忠跃.铜制剂及在世界上的发展[J].中外葡萄与葡萄酒，2001（2）：34.