【摘 要】
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目的证实癌性胸腔积液中存在树突状细胞(dendritic cell,DC)的前体细胞,体外培养可获得DC.方法双层Ficoll密度梯度离心法获得胸腔积液中的单个核细胞,在贴壁的单个核细胞中加入粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素4(IL-4)、肿瘤坏死因子α(TNF-α).应用光镜、电镜观察细胞形态;用流式细胞仪对DC进行表型鉴定;四甲基偶氮唑蓝法检测DC的功能;酶联免疫吸附法
【机 构】
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200030,上海市胸科医院肺内科,200030,上海市胸科医院肿瘤研究所,,,,,
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目的证实癌性胸腔积液中存在树突状细胞(dendritic cell,DC)的前体细胞,体外培养可获得DC.
方法双层Ficoll密度梯度离心法获得胸腔积液中的单个核细胞,在贴壁的单个核细胞中加入粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素4(IL-4)、肿瘤坏死因子α(TNF-α).应用光镜、电镜观察细胞形态;用流式细胞仪对DC进行表型鉴定;四甲基偶氮唑蓝法检测DC的功能;酶联免疫吸附法(ELISA)检测致敏的DC刺激T淋巴细胞分泌干扰素γ(IFN-γ)的含量.
结果GM-CSF和IL-4是DC体外增殖、分化的必要条件,TNF-α能促进DC的成熟及功能表达.培养的DC显示其特有的形态特征,并且高表达CD86(84.6±6.1)%、HLA-DR(81.1±13.0)%、CD40(42.0±21.7)%、CD1a(20.0±9.5)%,低表达CD14(4.8±3.5)%.DC具有强大的刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力和明显的诱导T淋巴细胞分泌IFN-γ的功能.
结论恶性胸腔积液中可以获得具备正常形态、表型、功能的成熟DC.
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