【摘 要】
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根据已经发表的猪流行性腹泻病毒N基因序列（GenBank：KX016034.1）,设计1对特异性引物（上、下游分别插入Bam HⅠ和XhoⅠ酶切位点）,通过RT-PCR技术扩增N基因,在测序鉴定正确后经Bam H
【机 构】
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甘肃农业大学动物医学院,中农威特生物科技股份有限公司
【基金项目】
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甘肃省科技计划项目（1104NKCA167）
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根据已经发表的猪流行性腹泻病毒N基因序列（GenBank：KX016034.1）,设计1对特异性引物（上、下游分别插入Bam HⅠ和XhoⅠ酶切位点）,通过RT-PCR技术扩增N基因,在测序鉴定正确后经Bam HⅠ和XhoⅠ双酶切,将其克隆至原核表达载体pET-32a上,获得重组表达质粒pET32a-N。表达的蛋白质经纯化后进行Western blotting鉴定分析。以表达的PEDV-N蛋白作为抗原,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA筛选及亚克隆,获2株PE
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