【摘 要】
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目的:实现HBV PreS1-EGFP融合表达质粒高效转化毕赤氏酵母。方法:分别将乙肝病毒前S1蛋白和绿色荧光蛋白克隆到表达载体pPIC9K,获得重组质粒pPIC9K-EGFP-preS1,SacI位点酶切
【机 构】
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汕头大学医学院; 中科院北京微生物研究所;
【基金项目】
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国家自然科学基金(30801240);国家自然科学基金(30901609);广东省自然科学基金(No8451503102001823)
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目的:实现HBV PreS1-EGFP融合表达质粒高效转化毕赤氏酵母。方法:分别将乙肝病毒前S1蛋白和绿色荧光蛋白克隆到表达载体pPIC9K,获得重组质粒pPIC9K-EGFP-preS1,SacI位点酶切线性化,采用醋酸锂(LiAc)和二硫苏糖醇(DDT)对巴斯德毕赤氏酵母Pichia Pastoris GS115预处理,在电压1.5kv、电容25F条件下进行电击转化。电击后立即迅速稀释在冰预冷的1M的山梨醇中,混匀后取100l的菌液均匀涂布YNBG平板,利用HIS4标记筛选转化子。结果:发现改进后的转化方法pPIC9K-EGFP-preS1的转化率提高到164×104个转化子/1μgpPIC9K-EGFP-preS1 DNA,是传统方法的6.6倍。结论:采用改进后的方法能有效的提高质粒pPIC9K-EGFP-preS1的转化率,为筛选高表达HBVPreS1-EGFP融合蛋白的转化子打下基础。
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