【摘 要】
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目的:构建鸡B淋巴细胞cDNA T7噬菌体表达文库并对文库质量进行鉴定.方法:利用oligo(dT)-纤维素亲和层析从SPF雏鸡法氏囊细胞制备mRNA,合成的双链cDNA定向克隆到T7 EcoR Ⅰ/Hi
【机 构】
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河南省农业科学院,河南教育学院,浙江大学,河南科技学院
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目的:构建鸡B淋巴细胞cDNA T7噬菌体表达文库并对文库质量进行鉴定.方法:利用oligo(dT)-纤维素亲和层析从SPF雏鸡法氏囊细胞制备mRNA,合成的双链cDNA定向克隆到T7 EcoR Ⅰ/Hind Ⅲ载体臂,包装并构建cDNA表达文库.对文库进行滴度测定和重组子测定.扩增文库并进行PCR鉴定插入序列的长度及分布.结果:文库初始滴度为5×107pfu/mL,扩增后滴度达到1.88×10 10 pfu/mL.插入片段平均长度1 440 bp,主要分布在750～2000 bp之间.结论:构建的鸡B淋巴细胞cDNA T7噬菌体表达文库具有很高的质量,为进一步研究鸡B细胞发育以及传染性法氏囊病毒(IBDV)的分子致病机制奠定了实验基础.
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