【摘 要】
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[目的]扩增烟草NtKRP基因尾部含T1083替换的片段,将其克隆入pGBKT7载体中.[方法]以pBI121KE质粒为模板进行PCR反应,将得到的PCR产物凝胶回收后等摩尔混合,取适量作为模板,得
【机 构】
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商丘职业技术学院,河南商丘,476100
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[目的]扩增烟草NtKRP基因尾部含T1083替换的片段,将其克隆入pGBKT7载体中.[方法]以pBI121KE质粒为模板进行PCR反应,将得到的PCR产物凝胶回收后等摩尔混合,取适量作为模板,得到含定点突变的尾部片段.将该PCR产物克隆入Sma I线性化的pUC19载体,构建含T1083替换的重组子pUC19Ts.通过蓝白斑筛选得到的重组子进行BamH I-Sma I双酶切鉴定,将筛选出的正确重组子送交联合基因测序.将pGBKT7和测序正确的pUC19Ts质粒均用BamH I-Sma I双酶切,分别回收1 320 bp的融合片段和7.3 kb的载体片段进行连接,转化并筛选得到重组子,任意挑取2个单菌培养后提取质粒进行BamH I-Sma I双酶切鉴定.[结果]成功构建了NtKRP尾部含T1083替换的BD融合质粒载体pGBKT7-TS.[结论]为进一步研究NtKRP尾部T1083替换对NtKRP与靶物质结合的影响奠定了实验基础.
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