【摘 要】
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目的:构建过表达FAS相关因子1(fas-associated factor 1,FAF1)基因的慢病毒载体,探讨其对胃癌细胞凋亡的影响。方法:RT-PCR法扩增FAF1cDNA,亚克隆至GV218质粒中,经酶切及DNA
【基金项目】
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广西自然科学基金(2012GXNSFDA053021);广西卫生厅重点课题(重2012092)
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目的:构建过表达FAS相关因子1(fas-associated factor 1,FAF1)基因的慢病毒载体,探讨其对胃癌细胞凋亡的影响。方法:RT-PCR法扩增FAF1cDNA,亚克隆至GV218质粒中,经酶切及DNA测序鉴定正确以后,把含有FAF1基因的重组质粒与pHelper1.0和pHelper2.0载体质粒转染至293T细胞包装慢病毒。用包装好的慢病毒感染人胃癌细胞HGC-27,Real time PCR和蛋白质印迹法检测转染前后FAF1基因和蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡的改变。结果:FAF1基因扩增产物长度为1 996bp,酶切及测序结果鉴定GV218-FAF1质粒构建正确,成功包装的慢病毒滴度为2×108 TU/mL。HGC-27细胞转染FAF1过表达慢病毒48h后,细胞形态由长梭形变得不规则。过表达FAF1慢病毒转染组FAF1基因mRNA表达水平2.436±0.538,是阴性对照组1.086±0.226的2.24倍,P<0.001;是空载转染组1.182±0.381的2.06倍,P<0.001。过表达FAF1慢病毒转染组FAF1蛋白相对表达水平1.515±0.377,显著高于阴性对照组的0,P<0.001;也显著高于空载转染组的0,P<0.001。过表达FAF1慢病毒转染组凋亡率(84.66±5.92)%显著高于阴性对照组的(4.60±3.80)%,P<0.001;也显著高于空载转染组的(7.32±3.82)%,P<0.001。结论:成功构建并鉴定FAF1基因过表达慢病毒载体,FAF1基因表达上调使胃癌细胞凋亡增加。
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