【摘 要】
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目的 探究Twinfilin-1(Twf-1)基因对H9C2心肌细胞凋亡和增殖的影响.方法 构建Twf-1 siRNA、pCXN2-Flag空质粒、pCXN2-Flag-h Twf-1过表达质粒,将实验用H9C2心肌细胞分为5组,
【机 构】
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新疆医科大学第一附属医院 乌鲁木齐 830054
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目的 探究Twinfilin-1(Twf-1)基因对H9C2心肌细胞凋亡和增殖的影响.方法 构建Twf-1 siRNA、pCXN2-Flag空质粒、pCXN2-Flag-h Twf-1过表达质粒,将实验用H9C2心肌细胞分为5组,即空白对照组、阴性对照组、Twf-1沉默组、Twf-1沉默+空质粒组、Twf-1沉默+过表达Twf-1组,分别用空白试剂、Twf-1 siRNA慢病毒、Twf-1 siRNA慢病毒+pCXN2-Flag空质粒、Twf-1 siRNA慢病毒+pCXN2-Flag-h Twf-1过表达质粒转染H9C2心肌细胞.转染72 h后,采用荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测目的基因Twf-1表达情况,采用CCK8检测不同组别心肌细胞增殖情况,采用流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况.结果 荧光显微镜下可见慢病毒转染48 h后,阴性对照组和Twf-1沉默组80％以上细胞均有绿色荧光标记.与空白对照组和阴性对照组相比,Twf-1沉默组、Twf-1沉默+空质粒组心肌细胞中Twf-1基因的表达水平及细胞增殖率均明显降低(P<0.05),心肌细胞凋亡率均明显增加(P<0.05),Twf-1沉默+过表达Twf-1组心肌细胞中Twf-1基因的表达水平及细胞增殖率则明显增加(P<0.05),其心肌细胞凋亡率与空白对照组和阴性对照组比较无统计学意义,与Twf-1沉默组、Twf-1沉默+空质粒组相比则明显降低,组间差异具有统计学意义(P<0.05).结论 靶向沉默Twf-1基因表达可有效抑制心肌细胞增殖,促进心肌细胞凋亡,过表达Twf-1基因能在一定程度上逆转Twf-1沉默对心肌细胞增殖和凋亡功能的影响.
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