【摘 要】
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如果肝脏严重受损致使肝细胞大部分坏死,或由于某些原因(肝毒性物质、致癌物质的作用)抑制残存肝细胞增殖时,肝内前体/干细胞——肝卵圆细胞便被激活并分化生成肝细胞和胆管
【机 构】
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暨南大学生命科学院,暨南大学生命科学院,华中科技大学同济医学院附属协和医院肝胆外科中心,暨南大学生命科学院,暨南大学生命科学院,暨南大学生命科学院,暨南大学生命科学院,暨南大学生命科学院 广州5106
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如果肝脏严重受损致使肝细胞大部分坏死,或由于某些原因(肝毒性物质、致癌物质的作用)抑制残存肝细胞增殖时,肝内前体/干细胞——肝卵圆细胞便被激活并分化生成肝细胞和胆管细胞等以参与肝修复.基于此理论,人们建立了啮齿类动物肝卵圆细胞诱导实验模型.但显然上述模型不适用于人类,所以有必要开发一种适用于人类的、高效的肝卵圆细胞的新诱导模型.选用小鼠胚胎干细胞,转成拟胚体分化3天后分组,诱导组添加肝细胞生长因子(HGF)、表皮生长因子(EGF)作定向诱导分化.其间用免疫细胞化学(ICC)检测肝卵圆细胞标志物A6等的表达,用流式细胞仪筛选肝卵圆细胞并行RT-PCR、透射电镜检测.所筛选的肝卵圆细胞进一步体外培养并进行ICC和RT-PCR,检测其分化生成成熟的肝细胞和胆管细胞的能力.研究证实胚胎干细胞体外定向诱导生成肝实质细胞的过程中,存在着有双向分化能力的肝卵圆细胞这个中间分化阶段.诱导组肝卵圆细胞分化率均显著地高于对照组,最高时可达6.11%左右.HGF和EGF能显著性诱导胚胎干细胞源性卵圆细胞的生成.流式细胞仪筛选Sca-1+/CD34+细胞占总细胞数的4.59%,其中A6阳性肝卵圆细胞占90.81%左右.使用流式细胞仪可获得高富集的A6+/Sca-1+/CD34+肝卵圆细胞.提供了一种可适用于人类的肝卵圆细胞的新诱导模型.
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