研究TNF-α对急性肝功能衰竭(ALF)大鼠肠黏膜Claudin-1、Zonula Occludens (ZO)-1蛋白和肌球蛋白轻链激酶(MLCK)表达的影响及TNF-α拮抗剂干预效果。
方法健康雄性SD大鼠270只，重复造模5次，每次54只，按照随机数字表法将54只大鼠分为正常对照组、模型组和干预组。正常对照组6只仅腹腔注射0.9%氯化钠溶液12 mL/kg；模型组和干预组各24只，均腹腔注射D-GalN 1 200 mg/kg,建立ALF模型；干预组在给予D-GalN 24 h前腹腔注射TNF-α拮抗剂(rhTNFR∶Fc)12.5 mg/kg。模型组与干预组于造模后8、24、48、72 h各时间点处死6只大鼠，正常对照组于72 h同时处死动物。应用生物化学方法检测肝功能；ELISA法检测血清TNF-α水平；肝组织和末段回肠组织经HE染色检测；免疫组织化学和Western印迹法检测各组末段回肠Claudin-1、ZO-1蛋白和MLCK的表达。组内两两比较采用t检验。
结果用D-GalN成功诱导ALF模型。模型组72 h转氨酶开始下降时，TBil继续上升，出现胆酶分离现象，而干预组未出现该现象。模型组72 h末段回肠可见绒毛倒伏，部分绒毛尖端脱落，黏膜层可见大量中性粒细胞浸润；干预组末段回肠结构完整，黏膜层可见少量中性粒细胞浸润。模型组、干预组血清TNF-α水平均在24 h升至高峰，分别为(239.83±15.81)、(182.71±17.08) ng/L；均较正常对照组[(24.19±3.57) ng/L]显著升高，差异均有统计学意义(t值分别为22.68、15.73，均P<0.01)；而干预组显著低于模型组，差异有统计学意义(t＝4.58，P<0.01)。模型组大鼠回肠黏膜Claudin-1、ZO-1相对表达量在早期均逐渐降低，24 h下降至最低，分别为0.355±0.068、0.387±0.091，均显著低于正常对照组(1.640±0.188、1.015±0.150)，差异有统计学意义(t值分别为12.87、7.14，均P<0.01)；干预组大鼠回肠黏膜Claudin-1、ZO-1蛋白相对表达量亦于24 h下降至最低，分别为1.051±0.370、0.642±0.082，明显低于正常对照组(t值分别为2.84、4.36，均P<0.05)，但均高于模型组，差异有统计学意义(t值分别为3.70、4.15，均P<0.01)。模型组、干预组大鼠回肠MLCK相对表达量在早期均逐渐升高，24 h均上升至高峰，分别为1.298±0.194、1.033±0.073，明显高于对照组的0.460±0.069，差异有统计学意义(t值分别为8.16、11.44，均P<0.01)，但干预组低于模型组，两者差异有统计学意义(t＝2.56，P<0.05)。
结论ALF大鼠模型的血清TNF-α水平升高，Claudin-1和ZO-1蛋白表达下降、MLCK含量增加，使得细胞收缩加剧及细胞间隙增大。而TNF-α拮抗剂通过抑制MLCK含量的增加、阻止Claudin-1和ZO-1蛋白表达的下降，使肝功能明显改善、降低细胞炎性反应和肝细胞凋亡。