【摘 要】
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目的应用SYBR荧光实时定量RT-PCR法检测转化生长因子-β1(transforming growth factor beta1,TGF-β1)诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblasts,KFs)中纤溶酶原激活物抑制
【机 构】
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安徽医科大学临床药理研究所; 安徽医科大学皮肤病研究所,安徽医科大学第一附属医院皮肤性病科; 教育部"重要遗传病基因资源利用"重点实验室(省部共建); 安徽医科大学皮
【基金项目】
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中国博士后科学基金资助项目(No20060400716);教育部留学回国人员科研启动基金资助项目(No20070024);安徽省教育厅自然科学基金重点资助项目(NoKJ2008A30ZC);安徽医科大学校人才基金资助项目
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目的应用SYBR荧光实时定量RT-PCR法检测转化生长因子-β1(transforming growth factor beta1,TGF-β1)诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblasts,KFs)中纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor1,PAI-1)mRNA的表达。方法体外分离培养KFs,应用不同浓度(1.25~20 pmol.L-1)TGF-β1刺激KFs 3 h或TGF-β1(10 pmol.L-1)刺激KFs不同时间(0.5~6 h),采用SYBR Green I荧光实时定量RT-PCR法检测,以β-actin基因作为内参,计算各组PAI-1 mRNA的相对表达量。结果与空白对照组相比,TGF-β1能明显诱导KFs中PAI-1 mRNA的表达,10、20pmol.L-1浓度组表达比值分别增至4.19及4.44倍(P<0.01);TGF-β1(10 pmol.L-1)的1、2 h时间组表达比值分别增至2.29及2.41倍(P<0.05),3、6 h时间组分别增至4.19及5.83倍(P<0.01)。提示,TGF-β1诱导KFs中PAI-1mRNA表达的最适浓度为10 pmol.L-1、最适时间为3 h。结论利用SYBR荧光实时定量RT-PCR法检测TGF-β1诱导KFs中PAI-1 mRNA的表达,为进一步研究瘢痕疙瘩中TGF-β1信号通路的靶基因调控机制,以及开发治疗瘢痕疙瘩的新药提供了基础。
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