【摘 要】
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目的:制备、鉴定重组人成纤维细胞生长因子4(rhFGF4)蛋白,观察rhFGF4对高糖损伤人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用及相关分子机制.方法:构建pET3d-hFGF4重组质粒,利用大肠杆
【机 构】
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温州医科大学 药学院,浙江 温州 325035
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目的:制备、鉴定重组人成纤维细胞生长因子4(rhFGF4)蛋白,观察rhFGF4对高糖损伤人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用及相关分子机制.方法:构建pET3d-hFGF4重组质粒,利用大肠杆菌表达系统高效表达rhFGF4蛋白.可溶性目的蛋白大多以包涵体的形式表达,制备方法为建立包涵体清洗、变性及肝素柱柱上复性与纯化.采用MTT法检测rhFGF4蛋白促细胞增殖的生物学活性,建立细胞损伤模型并用Western blot技术检测NF-κB、JNK以及p38蛋白的磷酸化表达.结果:成功构建重组质粒pET3d-hFGF4.SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定结果表明,rhFGF4蛋白在大肠杆菌中成功高效表达.细胞实验证实rhFGF4蛋白通过阻止NF-κB、JNK以及p38的磷酸化来修复高糖诱导损伤的HUVEC并抑制其凋亡,降低其MDA、ROS含量.结论:本研究成功得到高纯度并具有生物学活性的rhFGF4蛋白,并证实其对高糖损伤的HUVEC的保护作用与改善氧化应激水平相关.
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