【摘 要】
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目的 应用原核载体表达PbTIP胞外重组蛋白片段(rPbTIP)并在体外刺激树突状细胞DC2.4,研究在体外PbTIP片段蛋白对DC2.4细胞是否有一定的免疫调节功能.方法 用实验室保存的含有
【机 构】
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中国医科大学基础医学院病原生物学教研室,辽宁沈阳,110122
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目的 应用原核载体表达PbTIP胞外重组蛋白片段(rPbTIP)并在体外刺激树突状细胞DC2.4,研究在体外PbTIP片段蛋白对DC2.4细胞是否有一定的免疫调节功能.方法 用实验室保存的含有pET32a(+)-rPbTIP载体的E.coil BL-21菌株表达并纯化rPbTIP蛋白;然后在体外培养的DC2.4细胞中加入不同浓度的rPbTIP蛋白刺激,应用细胞增殖实验检测rPbTIP对DC2.4细胞是否有促进增殖的作用;对rPbTIP刺激后的DC2.4细胞进行RT-PCR检测,分析DC2.4细胞表面分子MyD88、NF-κB、TLR9、TLR4的mRNA含量变化;rPbTIP刺激DC2.4后,应用ELISA法检测细胞培养上清中TNF-α、IL-10、TGF-β和IFN-γ细胞因子水平.结果 成功表达出rPbTIP蛋白,纯化后蛋白浓度为1 mg/mL;1ng/mL的rPbTIP对DC2.4细胞有一定促进增殖作用,并且细胞培养上清中TNF-α水平明显升高,有统计学意义(P＜0.05),其他细胞因子水平变化无统计学意义(P＞0.05);100 ng/L的rPbTIP对DC2.4细胞可能有一定抑制作用,并且可以上调DC2.4表面MyD88、NF-κB、TLR9 mRNA含量.结论 在体外,rPbTIP蛋白对DC2.4细胞的免疫功能具有一定的调节作用,不同浓度rPbTIP蛋白的作用可能不同,需要进一步研究.
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