为研究烟叶中的萜类成分含量,采用选择反应监测模式,建立了同时测定新鲜烟叶中反,反-金合欢醇、α-植醇、顺冷杉醇、β-植醇、（1S,2E,4R,6R,7E,11E）-2,7,11-西柏烷三烯-4,6-二醇（α-CBD）、（1S,2E,4S,6R,7E,11E）-2,7,11-西柏烷三烯-4,6-二醇（β-CBD）、香紫苏醇、赖百当-13-烯-8,15-二醇、角鲨烯、2,3-环氧化鲨烯、双氢速甾醇、胆固醇、菜籽甾醇、麦角甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、羊毛甾醇、β-谷甾醇、β-香树脂醇、α-香树脂醇、鹅去氧胆酸等21种萜类成分的气相色谱-串联质谱（GC-MS/MS）方法;并采用该方法对云南、河南、贵州等3个产区的成熟期新鲜烟叶样品进行了分析。结果表明:在线性范围内21种萜类成分的R²为0.999 0～0.999 8;方法检测限为12.7～308.7 ng·g^-1,定量限为35.8～984.6 ng·g^-1;日内、日间精密度（RSD）分别为0.19%～8.28%、1.02%～9.35%。不同产区烟叶中主要萜类成分α-CBD的含量高低顺序为云南(98.83μg·g^-1)>河南(57.04μg·g^-1)>贵州(38.61μg·g^-1),且3个产区之间存在显著性差异。贵州产区烟叶中萜类成分含量的分布较云南和河南产区烟叶差异更大,遵义种植的南江3号品种烟叶中萜类含量与其他3个品种差异明显。该方法前处理简单,分析的萜类物质覆盖面广,可用于批量烟叶样品的检测。