生物测定法用于中药质量评价的探索研究——以夏枯草抗氧化活性与总酚酸含量相关性的研究为例

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研究不同来源及不同部位夏枯草的抗氧化活性,并对其所含原儿茶酸、原儿茶醛、咖啡酸、异迷迭香酸苷和迷迭香酸5种酚酸类成分含量进行测定,探讨夏枯草抗氧化活性与总酚酸含量间的相关性,为制定科学合理的质量标准服务。以夏枯草50%甲醇提取液为研究对象,分别采用DPPH和HPLC测定夏枯草的抗氧化活性及原儿茶酸、原儿茶醛、咖啡酸、异迷迭香酸苷和迷迭香酸5种酚酸类成分的含量。DPPH采用夏枯草50%甲醇提取液0.5 m L与0.1 mmol·L~(-1)DPPH·乙醇溶液反应60 min,于517 nm波长处测定吸光度,用清除率及IC50进行抗氧化活性评价。HPLC采用Epic C18色谱柱,乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,280 nm进行检测。采用偏最小二乘法对多批不同产地和不同部位夏枯草的抗氧化能力与其中5种酚酸类成分的总含量间的相关性进行分析。夏枯草50%甲醇提取液与0.1 mmol·L~(-1)DPPH·乙醇溶液反应的量效范围为0.300~1.65 g·L~(-1)(药材),原儿茶酸、原儿茶醛、咖啡酸、异迷迭香酸苷和迷迭香酸的进样量分别在0.007 84~0.980,0.011 5~1.44,0.008 64~1.08,0.080 0~1.00,0.079 8~0.998μg与各自峰面积积分值成良好的线性关系。5种成分的平均加样回收率分别为97.76%,96.88%,100.3%,102.1%,104.5%,RSD分别为1.8%,1.6%,1.7%,0.62%,0.75%。夏枯草各部位的抗氧化能力与总酚酸含量和在一定的药材质量范围内具有良好的线性相关性。因此,在确定的药材质量范围内,采用DPPH生物测定法结合HPLC含量测定法共同用于夏枯草药材的质量控制,可考虑作为一种新的尝试用于夏枯草质量标准的修订。 To study the antioxidant activity of Prunella vulgaris from different sources and different parts, and the contents of five phenolic acids including protocatechuic acid, protocatechuic aldehyde, caffeic acid, isomerises and rosmarinic acid were studied. Determination, to explore the correlation between anti-oxidation activity of Prunella vulgaris and total phenolic acid content, in order to develop a scientific and reasonable quality standards. The extract of Prunella vulgaris 50% methanol was used as the research object. The antioxidant activity of Prunella vulgaris was determined by DPPH and HPLC respectively. The activities of protocatechuic acid, protocatechuic aldehyde, caffeic acid, isocharisin and rosmarinic acid 5 Species phenolic acids content. The reaction of DPPH with 0.5 m L of 50% methanol extract of Prunella vulgaris against 0.1 DPPH · ethanol solution of 0.1 mmol·L -1 for 60 min, the absorbance at 517 nm was measured, and the anti-oxidative activity was evaluated by clearance rate and IC50. Epic C18 column and acetonitrile-0.1% formic acid aqueous solution were used as the mobile phase in gradient elution with HPLC at 280 nm. Partial least squares method was used to analyze the correlation between the antioxidant capacity of Prunella vulgaris and the total content of five phenolic acids in different lots and locations. The effective range of the reaction between 50% methanol extract of Prunella vulgaris and 0.1 mmol·L -1 DPPH · ethanol solution was 0.300-1.65 g · L -1 (medicinal material), protocatechuic acid, The injection volume of aldehyde, caffeic acid, isomerises and rosmarinic acid were 0.007 84 ~ 0.980, 0.011 5 ~ 1.44, 0.008 64 ~ 1.08, 0.080 0 ~ 1.00, 0.079 8 ~ 0.998μg and the respective peaks Area integral value into a good linear relationship. The average recoveries of the five components were 97.76%, 96.88%, 100.3%, 102.1% and 104.5%, respectively, with RSDs of 1.8%, 1.6%, 1.7%, 0.62% and 0.75%, respectively. Prunella various parts of the antioxidant capacity and total phenolic acid content and within a certain range of medicinal quality has a good linear correlation. Therefore, the DPPH bioassay combined with HPLC determination of the quality control of Prunella vulgaris herbs can be considered as a new attempt for the revision of the quality standards of Prunella within a certain range of medicinal quality.
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