【摘 要】
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为了建立一种能够方便、高效检测溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica)的方法,试验将溶血性曼氏杆菌重组质粒pET-32a-PlpE转化至BL21(DE3)感受态细胞,然后经IPTG诱导表达并纯化.以重组蛋白PlpE为包被抗原,通过优化抗原最佳包被浓度、一抗及二抗最佳稀释度、最佳反应时间和最佳显色时间等试验条件,建立了检测PlpE抗体的间接ELISA方法.结果 表明:重组质粒pET-32a-PlpE转化至感受态细胞BL21 (DE3)后利用IPTG诱导,重组蛋白主要在沉淀中大量表达,经
【机 构】
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金宇保灵生物药品有限公司/兽用疫苗国家工程实验室,呼和浩特010020;内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室,呼和浩特010018;金宇保灵生物药品有限公司/兽用疫苗国家工程实验
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为了建立一种能够方便、高效检测溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica)的方法,试验将溶血性曼氏杆菌重组质粒pET-32a-PlpE转化至BL21(DE3)感受态细胞,然后经IPTG诱导表达并纯化.以重组蛋白PlpE为包被抗原,通过优化抗原最佳包被浓度、一抗及二抗最佳稀释度、最佳反应时间和最佳显色时间等试验条件,建立了检测PlpE抗体的间接ELISA方法.结果 表明:重组质粒pET-32a-PlpE转化至感受态细胞BL21 (DE3)后利用IPTG诱导,重组蛋白主要在沉淀中大量表达,经包涵体纯化试剂盒纯化后获得纯度较高的目的 蛋白.重组蛋白PlpE具有良好的反应性,且蛋白大小符合预期.确定的检测条件为抗原包被浓度2μg/mL,一抗稀释度1∶300,酶标二抗稀释度1∶80000,反应时间45 min,一抗反应时间30 min,显色时间15 min.用该方法检出溶血性曼氏杆菌阳性血清的最低效价可达1∶1280,检测牛病毒性腹泻病毒阳性血清、牛传染性鼻气管炎病毒阳性血清、口蹄疫病毒阳性血清、副结核分枝杆菌阳性血清、布鲁氏杆菌阳性血清,结果均为阴性;批内重复性试验和批间重复性试验变异系数分别为0.70％～4.70％和0.50％～5.60％,均小于6.00％,该方法重复性较好.说明本试验建立的检测PlpE抗体的间接ELISA方法具有较高的敏感性和特异性,可用于临床牛血清抗体的检测.
其他文献
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传动装置试验台无损连接制动系统是传动装置试验台大转矩原位校准系统的重要组成部分,可实现对装甲车辆大转矩传动轴的无损连接制动.为了在满足现场空间要求的前提下保证原位校准的准确性,本文设计了一套与现场大转矩动力输出装置相匹配的无损连接制动系统.该系统不仅适用于现场狭小空间,而且可根据传动装置试验台输出转矩的大小提供与之匹配的传动轴抱紧力,实现对传动轴抱紧力的精准控制.通过现场试验,建立了传动装置试验台输出转矩与抱紧力之间的对应关系,实现了满足制动要求的同时不损伤传动轴的结果,同时通过试验表明,该无损连接制动系
研究城镇化发展程度对极端降雨的影响对于指导高度城镇化地区防洪排涝工作意义重大.在太湖流域城镇化区域划分基础上,基于1965～2014年70个雨量站的日降雨数据,采用空间分析法、Mann-Kendall趋势检验法、线性回归法、滑动平均法等提取各站极端降雨特征,分析城镇化背景下太湖流域极端降雨时空演变规律.结果表明,太湖流域城镇化发展较快的区域主要集中在武澄锡虞区、阳澄淀泖区、浦东浦西区;浙西区年极端降雨量较大,武澄锡虞区、阳澄淀泖区、浦东浦西区极端降雨量则较其他地区呈显著增加趋势,分别上升34.5、38.2
定量分析区域降水时空变化,对于区域水资源管理有积极意义.利用江苏省1960～2017年69个站点降水观测资料,基于线性回归法、小波分析与Anusplin插值法,研究了江苏省降水量变化趋势、周期性与空间分布特征.结果 表明,近58年来江苏省南北各地降水量变化速率为苏北(-9.97 mm/10a)＜苏中(6.34 mm/10a)＜苏南(26.11 mm/10a),其中苏南地区降水变化达到显著水平;该地降水变化存在4、13、15年的主周期.Anusplin插值分析表明,江苏省降水量为618～1360 mm,呈现
针对GPM_ IMERG降水数据存在系统误差的问题,以关中地区为例,在筛选海陆位置、地形、植被指数(NDVI)变量的基础上,运用支持向量机(SVM)、随机森林(RF)、高斯过程回归(GPR)模型对IMERG月降水数据进行订正,并通过34个站点数据验证订正模型.结果 表明,关中地区IMERG数据具有良好的可替代性,其决定系数R2达0.76,平均绝对误差MMAE、均方根误差RRMSE分别为6.94、9.77 mm;经机器学习模型订正后星地数据之间的R2提升了2.05％～58.33％,RRMSE、MMAE分别降
降雨时空分布是影响流域径流和泥沙输送的主要因素,阐明流域内径流、泥沙随降雨时空分布的变化规律,对流域洪水预报和水土流失防治具有重要的指导意义.为此,通过设置6种降雨时空分布情景,基于SWAT构建泾河流域日尺度的水文模型,分析了降雨对径流泥沙过程的影响.结果 表明,改变降雨中心对径流到达峰值的时间影响最大,仅在上游降雨可使径流峰值提前3～4 d;不同降雨时空变化对径流、泥沙影响时间的排序为降雨中心＞降雨移动方向＞降雨强度;降雨从下游向上游移动时,径流、泥沙同一天到达峰值,径流和泥沙的相关程度最高.
鉴于洪潮遭遇组合分析可为沿海地区洪涝防治规划与设计提供参考,采用Copula函数建立山东省小清河流域面雨量年极值和羊角沟站潮位年极值的联合分布函数,通过优选,最终选用Gumbel Copula函数分析两者组合概率,揭示其遭遇组合规律.结果 表明,重现期越小的设计面雨量(潮位)遭遇同量级潮位(面雨量)的概率越大;面雨量和潮位同为10年一遇时,联合重现期约36年;两者同为200年一遇,联合重现期约为947年,小清河流域平均面雨量和羊角沟潮位同频率遭遇是两者概率的1/4左右.
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试验研究了L-岩藻糖在乙腈-水混合溶剂中的溶解度及其粒度调控工艺,进行了热力学模型关联分析,并采用激光粒度仪对L-岩藻糖的粒度进行了表征.结果 表明:L-岩藻糖的溶解度随着乙腈含量的增多而减小,并与温度呈正相关关系.CNIBS/R-K模型对L-岩藻糖溶解度的拟合效果要优于Apelblat修正模型和Apelblat-Jouyban-Acree修正模型.L-岩藻糖可以通过控制乙腈的流加速率来直接获得粒度介于68～462 μm的产品.