【摘 要】
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目的应用噬菌体展示技术构建重组白细胞介素4受体(IL-4R)噬菌体单链抗体(sc Fv)库,并从抗体库中进行筛选。方法利用重组人IL-4R(rh IL-4R)蛋白免疫BALB/c小鼠,提取总RNA,反转
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目的应用噬菌体展示技术构建重组白细胞介素4受体(IL-4R)噬菌体单链抗体(sc Fv)库,并从抗体库中进行筛选。方法利用重组人IL-4R(rh IL-4R)蛋白免疫BALB/c小鼠,提取总RNA,反转录PCR扩增V_H和V_L基因,经重叠延伸PCR扩增出带有限制性酶切位点的sc Fv,用限制性内切酶SfiⅠ和NotⅠ分别双酶切sc Fv和p CANTAB5E载体,利用T4连接酶进行连接,转入感受态细菌E.coli TG1中制备转化子;在培养基中培养得到噬菌体单链抗体库;通过3轮富集和筛选,选择抗原亲和力最强的克隆进行测序分析。结果经过3轮筛选,构建了库容为2×10~8的rh IL-4R单链抗体库,测序结果显示抗rh IL-4R蛋白sc Fv基因全长741 bp,编码247个氨基酸。通过VBASE2数据库分析,抗rh IL-4R蛋白的V_H和V_L基因序列都存在3个互补决定区和4个骨架区。结论成功构建了抗rh IL-4R蛋白噬菌体sc Fv库。
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