大丽轮枝菌毒素诱导表达陆地棉cDNA序列的克隆与定位

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为获得陆地棉黄萎病抗性相关候选基因,利用棉花黄萎病菌大丽轮枝菌V991毒素粗提物诱导耐黄萎病陆地棉品种‘中棉12’应激基因的表达。在诱导幼根24h时间点提取总RNA,PCR法合成双链cDNA,应用抑制消减杂交技术[1],得到了差异表达的180个克隆。经反Northernblot筛选出15个受毒素粗提物诱导应激表达的阳性cDNA克隆,将其命名为Vdrg(responsegeneinducedbytoxinofVerticilliumdahliae)。本研究对所得阳性cDNA克隆进行了序列分析,并利用PimaS6与AcalaMaxxa海陆杂交四倍体棉花F2群体对Vdrg序列进行了棉花基因组定位。 In order to obtain the candidate genes related to resistance to Verticillium wilt in upland cotton, the expression of stress genes of ’Zhongmian 12’ in upland cotton variety Verticillium dahliae resistant to Verticillium dahliae was induced by the crude extract of Verticillium dahliae V991 from Verticillium dahliae. Total RNA was extracted at 24 h after root induction, and double-stranded cDNA was synthesized by PCR. Suppression subtractive hybridization [1] was used to obtain 180 differentially expressed cDNAs. Fifteen positive cDNA clones induced by the crude extracts of toxins were screened by reverse Northern blotting and named as Vdrg (responsegeneinducedbytoxinofVerticilliumdahliae). In this study, the positive cDNA clones were sequenced and the genomes of the Vdrg sequences were mapped using the F2 population of tetraploid cotton PimaS6 and AcalaMaxxa.
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