【摘 要】
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目的 研究miR-34a对脐静脉内皮细胞端粒酶活性及细胞衰老的影响.方法 原代培养人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),通过传代培养,计算细胞群
【机 构】
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100037,北京市 阜外心血管病医院心血管疾病国家重点实验室;100080,北京市 北京市海淀区妇幼保健院
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目的 研究miR-34a对脐静脉内皮细胞端粒酶活性及细胞衰老的影响.方法 原代培养人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),通过传代培养,计算细胞群体倍增水平(Population doublings,PDL),得到年轻的内皮细胞(PDL8)及衰老细胞模型(PDL44),检测两组细胞SIRT1、hTERT、c-myc、p53及miR-34a表达水平的差异.并在PDL8细胞中过表达miR-34a,PDL44细胞中抑制miR-34a的表达,qPCR检测以上基因表达水平、TRAP-qPCR法检测端粒酶活性、SA-β-gal法显示细胞衰老状态的变化.结果 SIRT1、hTERT、c-myc基因在PDL44的HUVECs细胞中表达下调,p53及miR-34a表达上调.PDL8 HUVECs过表达miR-34a 48h后,SIRT1和hTERT表达分别下调43％和25％,TRAP-qPCR显示端粒酶活性降低21％,SA-β-gal法染色阳性细胞百分比由5.1％上升至8.7％;PDL44 HUVECs抑制miR-34a的表达,SIRT1和hTERT表达水平分别上调63％和30％,端粒酶活性上升20％,SA-p-gal法染色显示衰老细胞数量未见显著性变化.结论 MiR-34a可以抑制内皮细胞SIRT1、hTERT基因表达及端粒酶活性,加速细胞衰老;抑制miR-34a可以上调SIRT1及hTERT表达,端粒酶活性升高;因此miR-34a可能通过抑制SIRT1表达和端粒酶活性的共同作用,参与内皮细胞衰老的调节.
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