【摘 要】
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为了快速检测牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus, BVDV）和区分不同基因型的BVDV,试验根据GenBank中BVDV的3种基因型5′端非翻译区（UTR）设计2对特异性引物和3个探针,优化引物和探针浓度,建立BVDV基因分型三重实时荧光定量RT-PCR方法,并验证该方法的特异性、敏感性和重复性。采集28份犊牛鼻拭子和40份粪便拭子样品,应用建立的方法进行检测
【机 构】
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内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室
【基金项目】
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内蒙古自治区科技重大专项（2020ZD0006）；
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为了快速检测牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus, BVDV）和区分不同基因型的BVDV,试验根据GenBank中BVDV的3种基因型5′端非翻译区（UTR）设计2对特异性引物和3个探针,优化引物和探针浓度,建立BVDV基因分型三重实时荧光定量RT-PCR方法,并验证该方法的特异性、敏感性和重复性。采集28份犊牛鼻拭子和40份粪便拭子样品,应用建立的方法进行检测,并与普通RT-PCR方法进行比较。结果表明:扩增体系经优化,BVDV-1、BVDV-2和BVDV-3的最佳引物浓度分别为350,350,200 nmol/L,最佳探针浓度分别为400,550,350 nmol/L,试验建立的三重实时实光定量RT-PCR方法从多种致牛腹泻和呼吸系统疾病的病原中只检测到BVDV-1、BVDV-2和BVDV-3;同时检测到的BVDV-1、BVDV-2和BVDV-3的最低检出量分别为1.0×10~1,1.0×10~2,1.0×10~1 copies/μL,而普通RT-PCR方法的最低检出量分别为1.0×10~2,1.0×10~5,1.0×10~3 copies/μL;组内变异系数和组间变异系数均小于5.0%。应用该方法从采集的68份临床样品中检出17份BVDV-1阳性样品,而普通RT-PCR只检测出12份BVDV-1阳性样品。说明试验建立的BVDV基因分型三重实时荧光定量RT-PCR方法具有特异性强、敏感性高和稳定性好等优点,可用于BVDV的3种基因型的快速鉴别。
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