【摘 要】
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目的 克隆表达、纯化金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)并测定其活性.方法 使用Clustal Omega比对不同来源Mn-SOD的序列,使用Swiss model网站
【机 构】
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永州职业技术学院生物化学教研室,湖南永州,425006;永州职业技术学院附属医院神经内科
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目的 克隆表达、纯化金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)并测定其活性.方法 使用Clustal Omega比对不同来源Mn-SOD的序列,使用Swiss model网站预测金黄色葡萄球菌Mn-SOD的三级结构.提取细菌DNA,以此为模板PCR扩增获得Mn-SOD基因并将其与pET28a连接,构建pET28a-Mn-SOD重组质粒.将重组质粒转化大肠埃希菌BL21 (DE3)获得重组菌BL/pET28a-Mn-SOD,使用IPTG诱导表达重组Mn SOD,通过镍柱亲和层析纯化Mn-SOD蛋白并测定不同pH条件下的酶活性. 结果 金黄色葡萄球菌Mn-SOD具有Mn-SOD的特征序列和锰离子结合位点.成功得到重组质粒pET28a-Mn-SOD,转化大肠埃希菌BL21后表达相对分子质量为24.8×103的Mn-SOD,使用Ni2+柱纯化后得到高纯度的Mn-SOD,且在pH值为7.5时活性较高,约为3 200 U/mL.结论 成功构建了pET28a-Mn-SOD重组质粒能,表达的Mn-SOD重组蛋白纯化后仍具有SOD活性.
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