【摘 要】
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克隆人胰岛素原基因,通过密码子优化和融合蛋白化学水解位点和纯化标签优化,构建人胰岛素原高效原核表达系统,为重组人胰岛素原的高效表达纯化制备奠定基础。根据大肠杆菌密
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31201969);厦门市科技计划项目(3502Z20093041)
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克隆人胰岛素原基因,通过密码子优化和融合蛋白化学水解位点和纯化标签优化,构建人胰岛素原高效原核表达系统,为重组人胰岛素原的高效表达纯化制备奠定基础。根据大肠杆菌密码子偏好性优化设计人胰岛素原基因,通过PCR技术获得重组基因,构建原核表达载体pET-32a-proinsulin,转化大肠杆菌表达株E.coli BL21,筛选人胰岛素原高效表达菌株,建立诱导表达和纯化融合蛋白技术方法。克隆获得优化的人胰岛素原重组基因,构建原核高效表达载体,获得优化的诱导表达方法和纯化的人胰岛素原。该研究为建立胰岛素高效制备的优化条件奠定基础。
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