【摘 要】
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目的：运用CRISPR/Cas9基因编辑技术,建立ATF4基因敲除的HepG2细胞株。方法：针对ATF4基因作用的功能区域,设计靶向ATF4基因Exon 1（外显子1）和Exon 2（外显子2）的两对gRNA。构建PX459-
【机 构】
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广西医科大学基础医学院,广西医科大学第一附属医院
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(No.81760454)
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目的：运用CRISPR/Cas9基因编辑技术,建立ATF4基因敲除的HepG2细胞株。方法：针对ATF4基因作用的功能区域,设计靶向ATF4基因Exon 1（外显子1）和Exon 2（外显子2）的两对gRNA。构建PX459-ATF4-gRNA重组质粒并转化DH5α感受态细胞,筛选出重组子后进行测序,通过测序验证所设计的gRNA的有效性。将PX459-ATF4-gRNA质粒转染到HepG2细胞中,挑选单克隆细胞,提取DNA,进行PCR检测与基因测序,获得敲除ATF4基因的细胞株。通过western blo
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