论文部分内容阅读
目的 观察人骨肉瘤细胞U2OS中TPP1表达受抑制后其端粒长度和放射敏感性变化,探讨在端粒酶阴性肿瘤细胞中TPP1与端粒长度及放射敏感性之间的关系.方法 根据TPP1mRNA编码序列设计并合成干扰siRNA序列,瞬时转染U2OS细胞;使用RT-PCR和Western blot分别在基因和蛋白水平检测干扰前后TPP1表达量的变化;利用Real-time PCR检测细胞端粒长度的变化;运用流式细胞术(Annexin V-FITC法)检测细胞凋亡情况;采用克隆形成实验分析放射敏感性的变化.结果 siRNA转染U2OS细胞后,siRNA干扰组的mRNA基因表达抑制率为(65.70±2.10)％,蛋白表达抑制率为(74.80 ±3.20)％;siRNA干扰组相对端粒长度(0.99 ±0.07)明显短于阴性对照组(1.64 ±0.05)及空白组(1.55±0.05) (F=113.68,P＜0.01),而阴性对照组与空白组间端粒长度差异无统计学意义;siRNA干扰组细胞凋亡率为(13.67±0.85)％,高于阴性对照组(8.59±0.38)％及空白组(8.18 ±0.21)％ (F=92.32,P＜0.01);siRNA干扰组细胞株SF2值(0.6074 ±0.0115)较空白组(0.8062±0.0056)降低显著(F=246.45,P＜0.01),放射增敏比为1.33.结论 在端粒酶阴性细胞U2OS中,特异性地沉默TPP1能够引起端粒长度的缩短,并且增加了细胞的放射敏感性,推测干扰TPP1引起端粒缩短很可能是其放射增敏的机制之一。