【摘 要】
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利用大肠杆菌内质粒间同源重组的方法。将狂犬病病毒G基因插入腺病毒基因组的E1基因区，构建了带有狂犬病病毒G基因的重组腺病毒质粒。重组质粒经Pme I酶切，线性化后特染293细胞
【机 构】
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中牧实业股份有限公司,中国农业大学生物学院
【基金项目】
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国家“863”计划资助项目(863-101-05-04-03)
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利用大肠杆菌内质粒间同源重组的方法。将狂犬病病毒G基因插入腺病毒基因组的E1基因区，构建了带有狂犬病病毒G基因的重组腺病毒质粒。重组质粒经Pme I酶切，线性化后特染293细胞，成功获得了均一的复制缺陷型重组腺病毒。荧光显微镜下能观察到重组腺病毒GFP报告基因的表达。用PCR方法证实了重组腺病毒基因组中含有G基因，RT—PCR方法可检测到G基因的特录产物mRNA，Western blotting方法能检测到重组腺病毒在293细胞中表达的G蛋白。此重组腺病毒在293细胞连续传代10次，PCR方法都能扩增出G
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