【摘 要】
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为了利用基因工程技术高效制备具有治疗Ⅱ型糖尿病功能的垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)衍生物RBAY-2,研究二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)对其酶解效应,采用基因重组技术表达重组肽RBAY
【机 构】
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暨南大学生物工程研究所,广州,510632;暨南大学医学院中医系,广州,510632;暨南大学分析测试中心,广州,510632
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为了利用基因工程技术高效制备具有治疗Ⅱ型糖尿病功能的垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)衍生物RBAY-2,研究二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)对其酶解效应,采用基因重组技术表达重组肽RBAY-2,纯化并鉴定目的肽RBAY-2,检测其生物活性;通过LC-MASS技术检测并绘制PACAF衍生物RBAY-2在体外模拟环境中的浓度-时间曲线,测定其体外模拟条件下的半衰期.实验结果表明:利用重组肽技术制备的RBAY-2的M为3.756k,纯度大于96%,其产率为18.3毫克/(每升发酵产物);制备的RBAY-2可与VPAC2受体特异结合并显著促进VPAC2-CHO细胞cAMP的产生,其受体半激活浓度(EC50)为0.93 nmol/L,目的肽RBAY-在体外可被DPPⅣ酶解,其半衰期为45.1 min.由此表明,利用本研究确立的表达、纯化策略可实现高活性RBAY-2的高效制备,应用LC-MASS技术研究药物肽体外酶解效应是一种方便、准确的检测方法,可用于药物肽稳定性的初步检测和高稳定性药物肽的体外筛选.
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