【摘 要】
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为了同时检测奶牛乳房炎中的6种主要致病菌，本试验分别针对金黄色葡萄球菌的nuc基因、无乳链球菌的ef-tu基因、绿脓杆菌的eta基因、停乳链球菌的16srRNA基因、致病性大肠杆菌的Phoa基因、牛支原体的opp D/F基因设计合成了6对特异性引物。在建立并验证单一PCR的基础上，构建多重PCR反应体系，对其反应体系进行优化，验证了该方法的特异性和敏感性。结果表明，该6重PCR检测方法对奶牛乳房炎
【基金项目】
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宁夏奶牛育种专项“优质高产奶牛安全健康养殖技术研究与示范”（2019NYYZ05）； 宁夏回族自治区东西部科技合作项目“肉牛健康养殖技术集成与示范”（2017BY078）；
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为了同时检测奶牛乳房炎中的6种主要致病菌，本试验分别针对金黄色葡萄球菌的nuc基因、无乳链球菌的ef-tu基因、绿脓杆菌的eta基因、停乳链球菌的16srRNA基因、致病性大肠杆菌的Phoa基因、牛支原体的opp D/F基因设计合成了6对特异性引物。在建立并验证单一PCR的基础上，构建多重PCR反应体系，对其反应体系进行优化，验证了该方法的特异性和敏感性。结果表明，该6重PCR检测方法对奶牛乳房炎的其他病原菌没有特异性扩增，对牛支原体、致病性大肠杆菌、停乳链球菌、绿脓杆菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌最低检出终浓度分别为1.1×10~5、1.41×10~6、1.6×10~3、3×10~5、3.8×10~4和7.3×10~3拷贝/μL。对采集的宁夏地区98份临床乳房炎病例乳样的检测结果显示：牛支原体、致病性大肠杆菌、停乳链球菌、绿脓杆菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌的检出率分别为10.2%（10/98）、14.2%（14/98）、14.2%（14/98）、12.2%（12/98）、18.3%（18/98）、18.3%（18/98）。本研究建立的多重PCR检测方法具有良好的特异性及敏感性，可用于奶牛乳房炎6种主要致病菌的检测及流行病学调查。
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