【摘 要】
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△9去饱和酶(△9 fatty acid desaturase,FAD9)是一种存在于内质网膜上的结合蛋白,其在脂肪酸代谢及细胞膜流动性的调节中发挥着重要作用.实验根据本实验室已克隆得到的
【机 构】
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上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室,上海201306
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△9去饱和酶(△9 fatty acid desaturase,FAD9)是一种存在于内质网膜上的结合蛋白,其在脂肪酸代谢及细胞膜流动性的调节中发挥着重要作用.实验根据本实验室已克隆得到的中华绒螯蟹FAD9基因的cDNA序列(GenBank登录号：JQ693685)设计引物,扩增得到中华绒螯蟹FAD9基因编码区序列,并将其与原核表达载体pCold-TF DNA进行连接,成功构建重组质粒pCold TF-fad9,将重组表达载体导入大肠杆菌BL21(DE3) pLysS中,pCold TF-fad9在IPTG的诱导下成功进行表达.SDS-PAGE电泳分析表明,重组蛋白的分子量约为100kDa,且主要存在于上清溶液中,为可溶性表达,当IPTG浓度为1mmol/L时,在15℃条件下诱导20h后重组蛋白的表达量最高.利用镍离子亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并进行Western-blotting免疫印迹实验,结果显示该重组蛋白可以与anti-His抗体特异性结合,进一步证明pCold TF-fad9重组蛋白在大肠杆菌中获得了成功表达.研究结果为中华绒螯蟹FAD9重组蛋白的纯化及其活性的检测打下基础,也为今后在体外开展脂肪酸去饱和酶的酶学研究提供了依据.
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