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目的:构建猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)的apx ⅠC基因与apx ⅡC基因缺失突变弱毒菌株APP85,为最终研制出APP的基因工程菌苗奠定基础。
方法:以标准菌株APP259中apxⅠC基因与apxⅡC基因为目的缺失基因,根据APP Ⅰ型菌apx基因组序列,利用软件设计分别扩增apxⅠCA上下游同源臂以及apxⅡCA上下游同源臂引物,构建重组自杀转移质粒,将该重组自杀转移质粒先后转移到亲本菌APP259后,利用同源重组筛选到基因缺失突变株。并对该重组菌株主要生物学特性,如溶血性、对小鼠的致病力以及免疫保护作用进行研究。
结果:经鉴定表明目的基因已经丢失、APP95基因缺失突变菌株丧失对绵羊血的溶血活性,毒力显著下降,并对免疫小鼠具有良好的安全性。免疫保护性实验表明,用该菌株免疫小鼠后,不仅对同血清型菌株的再次攻击保护率达到85%,对异种血清型菌株(7型)的攻击保护率达到75%。
结论:成功获得了apxⅠC基因与apxⅡC基因缺失突变弱毒菌株,可作为预防APP感染的疫苗候选株,为最终研制出APP的基因工程菌苗奠定基础。