论文部分内容阅读
【前言】单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes, LM)是一种兼性胞内寄生的革兰氏阳性致病菌,可以引起人和动物流产、脑膜脑炎、败血症等症状,是一种对公共卫生安全和畜牧业生产具有较大危害的人兽共患病原菌,是世界卫生组织(WorldHealth Organization,WHO)规定的四大食源性致病菌之一。该菌广泛存在于自然环境中,具有很强的环境适应能力,对低温、高渗、酸性、碱性、消毒剂等外界环境压力具有广泛适应性。LM较强的环境适应能力与其众多的环境适应因子密切相关,其中包括蛋白调控因子(SigmaB等)及非编码RNA(non-coding RNA, ncRNA)。ncRNA作为一种重要的调控因子,可以通过调节毒力相关基因及环境适应相关基因的表达以影响细菌毒力及对环境的适应能力。利用转录组测序技术及生物信息学分析发现LM中存在着大量的nc RNAs,目前研究发现ncRNA在细菌毒力、环境应激、金属离子转运、生物膜生成、糖代谢、侵染、胞内寄生等过程中发挥了一定作用。Rli60属于LMncRNA中的一员,其功能尚不清楚。【目的】为了解Rli60对LM环境应激及生物膜生成的影响,【方法】本研究利用基因重叠延伸PCR(SOE-PCR)及同源重组方法构建rli60基因缺失株LM-△rli60,分析其在不同温度、p H、高渗及酒精条件下的环境应激能力及生物膜生成能力,并通过实时定量PCR(qRT-PCR)检测生物膜生成相关基因gltB、gltC转录水平。【结果】结果发现,与LM-EGD株相比,LM-△rli60对30℃低温、42℃高温、碱性、3.5%酒精环境应激能力及生物膜生成能力减弱;qRT-PCR检测结果显示LM-△rli60中gltB、gltC基因的转录水平在24 h及48 h均有所降低。【结论】研究结果首次证实ncRNA Rli60对LM环境应激及生物膜生成发挥了重要的调控作用。