【摘 要】
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目的:观察P311在小鼠浅Ⅱ度烧伤模型中对表皮干细胞迁移的作用并探讨其机制.方法:(1)、选取8-10周C57BL/6雄性小鼠,应用YLS-Q5超级温控烫伤仪,于不同温度、时间、压力下制作小鼠烫伤模型,进行取材、固定、包埋、切片、HE染色,判断烫伤深度.(2)、取18只8-10周C57BL/6雄性小鼠,制作小鼠背部浅Ⅱ度烫伤模型,于伤后6、12、24、48、72h取创面及创周皮肤组织,采用免疫组化
【机 构】
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第三军医大学西南医院烧伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,疾病蛋白质组学重庆市市级重点实验室 400038
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目的:观察P311在小鼠浅Ⅱ度烧伤模型中对表皮干细胞迁移的作用并探讨其机制.
方法:(1)、选取8-10周C57BL/6雄性小鼠,应用YLS-Q5超级温控烫伤仪,于不同温度、时间、压力下制作小鼠烫伤模型,进行取材、固定、包埋、切片、HE染色,判断烫伤深度.(2)、取18只8-10周C57BL/6雄性小鼠,制作小鼠背部浅Ⅱ度烫伤模型,于伤后6、12、24、48、72h取创面及创周皮肤组织,采用免疫组化方法观察P311表达情况.(3)取6只新生C57BL/6小鼠,连续3天腹腔注射50μg/g溴脱氧尿苷(BrdU,2次/d)建立ESC示踪模型.7周后于其背部制作浅Ⅱ度烧伤创面.伤后72 h取创面皮肤组织制作连续切片,免疫组织化学染色,观察P311阳性和BrdU阳性细胞空间共定位情况.(3)构建腺病毒空载体pAdEasy-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)及P311腺病毒表达载体pAdEasy-EGFP-P311.同时制作小鼠全层皮肤缺损模型,于创面周围皮下注射相同数量腺病毒载体,观察创面愈合情况.
结果:小鼠皮肤浅Ⅱ度烧伤模型致伤条件为:温度65℃,致伤时间3s,压力为探头重力.浅Ⅱ度烧伤后不同时相点,P311在创面不同部位的表达量各不相同.伤后创面毛囊、新生表皮中P311表达量随时间延长逐渐上升;创周表皮及毛囊的P311表达量于伤后24h达高峰.应用BrdU标记的小鼠浅Ⅱ度烧伤创面新生表皮层可见P311阳性细胞和BrdU阳性细胞共定位.将纯化腺病毒注射于全层皮肤缺损模型创周,P311高表达组可明显促进创面愈合.
结论:P11可明显促进小鼠浅Ⅱ度烧伤创面愈合及表皮干细胞迁移.
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